幽门螺杆菌是一种常见的人类致病菌，其骨架蛋白MreB通过影响脲酶活性而参与调控其致病性。为了更准确地分离出MreB蛋白，用重叠延伸PCR技术（指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来的一项技术），将幽门螺杆菌MreB基因中编码终止密码子前的DNA序列与TAP标签（可以标记幽门螺杆菌基因组中任何一个基因，且不会影响基因的表达）进行连接，构建了融合表达蛋白MreB和TAP标签的质粒，实验流程如图所示。据图回答下列问题：
（1）重叠PCR获得带有标签的MreB基因。
①获得两种具有重叠片段DNA的过程中，PCR1和PCR2必须在不同的反应体系中，原因是 引物2和引物3中存在互补配对的片段，置于同一反应体系时，它们会发生结合而失去作用引物2和引物3中存在互补配对的片段，置于同一反应体系时，它们会发生结合而失去作用。
②PCR3反应体系中所加入的引物是 引物1、引物4引物1、引物4。
（2）重组质粒的构建。
①为将带有标签的MreB基因定向插入到pK18mobsacB质粒中，需要在引物末端添加限制酶识别序列，据图分析，在引物1添加的序列所对应的限制酶是 SmaISmaI，在引物4添加的序列所对应的限制酶是XhoIXhoI。经过这两种酶酶切的带有标签的MreB基因和pK18mobsacB质粒进行连接时，可选用 T4DNA连接酶T4DNA连接酶（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
②重组质粒中，KmR基因的作用是 为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】引物2和引物3中存在互补配对的片段，置于同一反应体系时，它们会发生结合而失去作用；引物1、引物4；SmaI；XhoI；T4DNA连接酶；为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/10 8:0:9组卷：31引用：1难度：0.5
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