λ噬菌体的遗传物质是双链线状DNA,其DNA两端的5′端是由12个碱基组成的互补黏性末端(cos位点),常作为基因工程的载体,转化频率比质粒高1000倍以上。如图是置换型λ噬菌体基因组的结构和连接过程的示意图,如表是若干种限制酶及其识别的序列,箭头处表示酶切位点。填充片段用于置换目的基因片段,其两端含有多个限制酶酶切位点。回答下列问题:
限制酶 | BamHⅠ | EcoRⅠ | MobⅠ | AclⅠ |
识别的序列 | G↓GATCC | G↓AATTC | ↓GATC | AA↓CGTT |
λ噬菌体DNA两端的cos位点可碱基互补配对相互连接
λ噬菌体DNA两端的cos位点可碱基互补配对相互连接
。XbaⅠ识别的碱基序列是 5′-CTCGAG-3′
5′-CTCGAG-3′
。过程②利用 DNA聚合
DNA聚合
酶补平黏性末端,加入的核苷酸是 胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸
胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸
。(2)置换载体用XbaⅠ切割并用脱氧核苷酸补平后,外源目的基因用表中的限制酶
BamHⅠ或MobⅠ
BamHⅠ或MobⅠ
处理,再用腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸补平,经DNA连接酶处理后可将目的基因替换到λ噬菌体上。与不补平黏性末端相比,上述操作方法的优点是可以避免 ①酶切后的λ噬菌体DNA的两个末端相连接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾连接
①酶切后的λ噬菌体DNA的两个末端相连接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾连接
(答出两点即可),从而提高目的基因与载体相连接的效率。(3)表面展示技术是通过重组DNA技术,将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白,从而可展示在细胞表面。凝集素与脂多糖结合,可发生凝集反应。研究人员将特异性识别蓝细菌表面脂多糖的凝集素(一种蛋白质),通过表面展示技术定位至芽孢杆菌的质膜上,这一技术实现了
凝集素特异性识别并结合蓝细菌,抑制蓝细菌繁殖
凝集素特异性识别并结合蓝细菌,抑制蓝细菌繁殖
,应用于修复水华现象。【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】λ噬菌体DNA两端的cos位点可碱基互补配对相互连接;5′-CTCGAG-3′;DNA聚合;胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸;BamHⅠ或MobⅠ;①酶切后的λ噬菌体DNA的两个末端相连接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾连接;凝集素特异性识别并结合蓝细菌,抑制蓝细菌繁殖
【解答】
【点评】
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