为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构建质粒，如图1所示。请回答下列问题：
（1）分别进行PCR扩增片段F1与片段F2时，配制的两个反应体系中不同的有 模板（片段F1、片段F2）、引物模板（片段F1、片段F2）、引物，扩增程序中最主要的不同是 反应时间反应时间。
（2）有关基因序列如图2。引物F2-F、F1-R应在下列选项中选用 CDCD。
A.ATGGTG-----CAACCA
B.TGGTTG----CACCAT
C.GACGAG---CTGCAG
D.CTGCAG-----CTCGTC
（3）将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，直接用于转化细菌。这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要有 限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶。
（4）转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛选，下列叙述错误的有 ABCABC。
A.稀释涂布平板需控制每个平板30～300个菌落
B.抗性平板上未长出菌落的原因一般是培养基温度太高
C.抗性平板上常常会出现大量杂菌形成的菌落
D.抗性平板上长出的单菌落无需进一步划线纯化
（5）为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引物F1-F和F2-R进行了PCR扩增，质粒P1～P4的扩增产物电泳结果如图3。根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有 P3、P4P3、P4。
（6）对于PCR产物电泳结果符合预期的质粒，通常需进一步通过基因测序确认，原因是 琼脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA分子的大小，无法确定待检测DNA分子的碱基序列琼脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA分子的大小，无法确定待检测DNA分子的碱基序列。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】模板（片段F1、片段F2）、引物；反应时间；CD；限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶；ABC；P3、P4；琼脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA分子的大小，无法确定待检测DNA分子的碱基序列
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/12 8:0:9组卷：264引用：1难度：0.4
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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