研究人员开展了人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如图。图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点，neor为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳球蛋白基因，GP基因为绿色荧光蛋白基因，请回答下列问题：
（1）荧光RT-PCR技术首先需要逆转录过程合成DNA，而后进行扩增所用的试剂盒中通常都应该含有 逆（反）转录酶逆（反）转录酶、耐高温的DNA聚合酶、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。过程①中 不能不能（填“能”或“不能”）从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR以获得hLF基因。在RT-PCR过程中，加入的引物需在 5′5′（填“5′”或“3′”）端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ（填“AseⅠ”、NheⅠ”、“SalⅠ”、BamHⅠ”）两种限制酶的识别序列，便于hLF基因插入pEB中。
（2）过程②中，为了使人乳铁蛋白基因在山羊的乳腺细胞中表达，最好将hLF基因插入到pEB质粒的 BLGBLG（填“neo”、“BLG”或“GFP”）基因之后，以使两个基因共用一个调控元件启动转录。
（3）过程③依据的主要原理是 生物膜具流动性生物膜具流动性，使脂质体与山羊乳腺上皮细胞融合，可以将重组质粒导入受体细胞。
（4）若将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察到山羊乳腺上皮细胞中发出绿色荧光，该现象并不能区分普通质粒或重组质粒，理由是 普通质粒和重组质粒上都有新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因普通质粒和重组质粒上都有新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因。故接下来可采用 PCR\电泳\分子杂交等PCR\电泳\分子杂交等技术检验基因是否成功转录。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆（反）转录酶；不能；5′；SalⅠ和BamHⅠ；BLG；生物膜具流动性；普通质粒和重组质粒上都有新霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因；PCR\电泳\分子杂交等
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/30 8:0:9组卷：3引用：2难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
