同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补，研究基因的功能。图1是科研人员利用该方法对大肠杆菌tacZ基因进行敲除与回补的相关过程，其中tetr是四环素抗性基因，sacB基因（2071bp）是蔗糖致死基因，LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题：
（1）过程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、缓冲液、Mg2+外，还需加入 引物（或P1、P2）和模板（或质粒1）引物（或P1、P2）和模板（或质粒1），所加dNTP的作用有 既作为原料又提供能量既作为原料又提供能量。
（2）为保证sacB基因和质粒2定向连接，设计引物P1、P2时，需在引物5'端添加限制酶 BamHⅠ、EcoRⅠBamHⅠ、EcoRⅠ的识别序列；过程②需要限制酶和 DNA连接DNA连接酶。
（3）过程③中，需先用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为 感受态感受态细胞。筛选导入质粒3的大肠杆菌时需在培养基中添加 四环素四环素。
（4）图2是对质粒3转化菌落进行PCR验证时的产物电泳结果，泳道4、5、7对应的菌株可能转化成功，判断的理由是 4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp。过程⑤PCR中设计引物P3、P4时，需在引物5′端分别添加 LacZLacZ基因两端的同源序列。
（5）过程⑦中，在含有四环素和 X-galX-gal的培养基中出现了白色菌落，即为筛选出的敲除LacZ基因菌株。过程⑧通过同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对LacZ基因进行回补，筛选LacZ基因回补菌株时应在培养基中添加 蔗糖和X-gal蔗糖和X-gal。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】引物（或P1、P2）和模板（或质粒1）；既作为原料又提供能量；BamHⅠ、EcoRⅠ；DNA连接；感受态；四环素；4、5、7的电泳结果接近（或大于）2071bp；LacZ；X-gal；蔗糖和X-gal
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/28 8:0:9组卷：12引用：4难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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