透明颤菌血红蛋白基因vgb表达产物VHb蛋白能使其在低氧的环境中生长良好。顶头孢霉是好氧性真菌，其发酵产物头孢菌素C有很大的市场需求量，但低氧环境影响其产量，传统发酵生产的增氧成本高。为提高产量科研人员将透明颤菌血红蛋白基因vgb基因和顶头孢霉pcpC启动子进行PCR拼接，并与质粒1构建重组质粒，如图。
注：hph是潮霉素抗性基因，Vgb基因与hph基因共用终止子。
回答下列问题：
（1）PCR过程需要设计引物，引物的作用是 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。
（2）据图所示，重叠延伸PCR拼接时，若启动子启动方向与引物3延伸方向一致，引物2和引物3的5′端需分别添加 XbaⅠ、BamⅠXbaⅠ、BamⅠ序列。拼接形成重组基因的目的是 使顶头孢霉在低氧的环境中生长良好，提高其发酵产物头孢菌素C的产量使顶头孢霉在低氧的环境中生长良好，提高其发酵产物头孢菌素C的产量。
（3）利用含有 潮霉素潮霉素的选择培养基筛选菌种，最后从个体生物学水平上鉴定，若 在低氧环境下，检测到头孢菌素C表达量增多在低氧环境下，检测到头孢菌素C表达量增多，则表示转化成功。
（4）为验证转化成功的重组菌株遗传稳定性，可将菌株在 不含不含（ 含/不含）潮霉素的液体培养基中连续转接10代，取第10代菌液采用 稀释涂布平板法稀释涂布平板法法接种到 含含（ 含/不含）潮霉素的固体培养基上，若能在固体培养基上生长，表明重组菌株遗传稳定性良好。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸；XbaⅠ、BamⅠ；使顶头孢霉在低氧的环境中生长良好，提高其发酵产物头孢菌素C的产量；潮霉素；在低氧环境下，检测到头孢菌素C表达量增多；不含；稀释涂布平板法；含
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/12 8:0:9组卷：33引用：2难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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