利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1基因（催化油脂合成的关键酶基因），导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，流程如图1。质粒pCAMBIA与PCR扩增出的DGAT1酶切位点如图所示。现有BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ三种限制酶，它们识别并切割的碱基序列如表，

BamHI	5'-G，GATCC-3
BglⅡ	5'-A↓GATCT-3
EcoR I	5'-GAATTC-3

（1）从紫苏组织细胞中提取总RNA时，需要加入RNA酶抑制剂，目的是

防止RNA酶降解RNA

防止RNA酶降解RNA

。过程①需要

逆转录

逆转录

酶的催化，过程②通过PCR技术实现，进行PCR时，需要在两种引物的5'端添加限制酶

BglⅡ

BglⅡ

的识别序列。
（2）启动子往往具有物种特异性，在载体pCAMBIA质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择

四尾栅藻

四尾栅藻

（填“紫苏DGAT1基因”、“大肠杆菌”或“四尾栅藻”）启动子。
（3）将DGAT1与pCAMBIA分别用限制酶切割后进行连接可形成重组质粒，目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是

有相同的黏性末端可发生碱基互补配对

有相同的黏性末端可发生碱基互补配对

。
若只考虑DNA片段的两两连接，构建重组质粒时可得到

3

3

种大小不同的连接产物。将重组质粒导入大肠杆菌后，可向培养基中加入

卡那霉素

卡那霉素

筛选出导入质粒的大肠杆菌。
（4）为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用

EcoRⅠ

EcoRⅠ

限制酶对不同的重组质粒进行酶切处理，得到的电泳结果如图2所示，其中

A

A

组重组质粒为所需质粒。（已知质粒pCAMBIA中EcoRⅠ的酶切位点与BamHI的酶切位点间的最短距离为600bp）
（5）转DGAT1基因四尾栅藻成功的标志是

转基因四尾栅藻成功表达出了DGATI基因控制的蛋白质

转基因四尾栅藻成功表达出了DGATI基因控制的蛋白质

。