土壤盐渍化影响水稻生长发育，将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图，其中bar为抗除草剂基因，Tetr为四环素抗性基因，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，①～⑦表示操作过程。
| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
| 识别位点及切割位点 | -G↓GATCC- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
5'
5'
（“5'”或“3'”）端，过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶催化 磷酸二酯（键）
磷酸二酯（键）
键的形成，还需要添加引物，应选用引物组合 ①④
①④
。①5'-CTTGGATGAT-3'
②5'-TAAGTTGTCT-3'
③5'-TAGTAGGTTC-3'
④5'-TCTGTTGAAT-3
⑤5'-ATTCAACAGA-3'
⑥5'-ATCATCCAAG-3'
（2）根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是
启动子
启动子
，其功能是 RNA聚合酶识别和结合的部位，（启动转录过程）
RNA聚合酶识别和结合的部位，（启动转录过程）
。基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向 相反
相反
（填“相同”或“相反”）。（3）过程③应选用限制酶
BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
切割质粒，利用所选限制酶进行操作的优势是 防止酶切后的质粒自身环化，保证OsMYB56和酶切后的质粒定向连接
防止酶切后的质粒自身环化，保证OsMYB56和酶切后的质粒定向连接
，切割后需要用 T4DNA连接酶
T4DNA连接酶
进行连接才能获得重组质粒。（4）为了筛选出含重组质粒的受体细胞，④过程应在添加
四环素
四环素
的选择培养基上培养。培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是 含未重组Ti质粒（或普通Ti质粒）的受体细胞也能正常生长
含未重组Ti质粒（或普通Ti质粒）的受体细胞也能正常生长
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】5'；磷酸二酯（键）；①④；启动子；RNA聚合酶识别和结合的部位，（启动转录过程）；相反；BclⅠ和SmaⅠ；防止酶切后的质粒自身环化，保证OsMYB56和酶切后的质粒定向连接；T4DNA连接酶；四环素；含未重组Ti质粒（或普通Ti质粒）的受体细胞也能正常生长
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/12 8:0:8组卷：18引用：5难度：0.5
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