干燥综合征（SS）是一种自身免疫病，患者血清中存在多种抗体，其中SSB抗体特异性最强。科研人员为生产SSB抗体的检测试剂，利用基因工程获得重组SSB蛋白，流程如下，请回答：
（1）利用RNA通过①过程获得cDNA需要 逆转录逆转录酶，从而获得SSB基因，SSB基因通过PCR扩增，其延伸阶段需要 耐高温的DNA聚合耐高温的DNA聚合酶的参与，而且在缓冲液中添加 Mg2+Mg2+以便激活该酶的活性。目的基因片段扩增n代，共需要 2n+1-22n+1-2个引物。
（2）PCR循环之前，常要进行一次预变性，预变性的目的是增加 模板DNA彻底变性模板DNA彻底变性的概率，用PCR方法扩增目的基因时 不必不必（填“必须”或“不必”）知道基因的全部序列。
（3）为与PET41a质粒连接，获得的目的基因A两端要含有 BamHI和XhoIBamHI和XhoI（写出限制酶名称）酶切位点。DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是 磷酸二酯键磷酸二酯键。
（4）获得含SSB基因的重组质粒后，进行如下实验切割原质粒和重组质粒，获得片段大小见表格（1kb=1000碱基对），分析数据，计算可得SSB基因的长度为 3Kb3Kb。与人基因组文库中的SSB基因相比，通过①过程获得的SSB基因结构特点 无无（填“有”或“无”）启动子、终止子和内含子等非编码序列。
| 限制酶 | EcoRI | BanHI和XhoI |
| 原质粒 | 8.1kb | 2.7kb、5.4kb |
| 重组质粒 | 3.4kb、5.0kb | 未做该处理 |
Ca2+
Ca2+
处理过的大肠杆菌内，并接种于添加 卡那霉素
卡那霉素
的培养基上，收集菌落进行鉴定，将阳性菌落进一步纯化后再将菌体破碎处理，筛选得到重组SSB蛋白。【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录；耐高温的DNA聚合；Mg2+；2n+1-2；模板DNA彻底变性；不必；BamHI和XhoI；磷酸二酯键；3Kb；无；Ca2+；卡那霉素
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/22 8:0:8组卷：6引用：1难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
