某学校研究小组准备克隆含有SLA-2基因的质粒，首先构建该基因的表达载体，然后通过大肠杆菌进行克隆重组质粒，过程如图1所示，下表为不同限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题：

限制酶	BclⅠ	NotⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ
识别序列及切割位点	T↓GATCA	GC↓GGCCGC	T↓CTAGA	↓GATC

​​
（1）图1过程①中，PCR扩增SLA-2基因需要的酶是

耐高温的DNA聚合酶

耐高温的DNA聚合酶

需要

2

2

种引物参与。
（2）在进行图1的②过程之前，需切割目的基因和质粒，选用的限制酶是

NotⅠ、XbaⅠ

NotⅠ、XbaⅠ

，③过程初步筛选导入重组质粒的大肠杆菌，应在含

氨苄青霉素

氨苄青霉素

（抗生素）的培养基上培养。
（3）在培养大肠杆菌前，检测培养基平板灭菌是否合格的操作是

将未接种的培养基放在适宜温度恒温箱中（倒置）培养一段时间，观察是否有菌落生成

将未接种的培养基放在适宜温度恒温箱中（倒置）培养一段时间，观察是否有菌落生成

。用稀释涂布平板法统计细菌数目时，统计的菌落数往往

少于

少于

（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数，原因是

当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

。若其中一个平板的菌落分布如图2，推测该同学接种时可能的操作失误是

涂布不均匀

涂布不均匀

。