PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：
（1）为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的 总RNA总RNA，再经 逆转录逆转录过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。与生物体内的DNA聚合酶相比，PCR技术中所用的DNA聚合酶特点是 耐高温耐高温。
（2）图1为所用载体图谱示意图，质粒DNA含有启动子，启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合的位点。质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能 准确进行复制准确进行复制。
| 名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
| HindⅢ | A↓AGCTT | EcoRⅠ | G↓AATTC |
| PvitⅡ | CAG↓CTG | PstⅠ | CTGC↓AG |
| KpnⅠ | G↓GTACC | BamHⅠ | G↓GATCC |
（3）构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶，其中，DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是
磷酸二酯键
磷酸二酯键
。图1中限制酶的识别序列及切割位点见图2，为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入 EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 PvitⅡ
PvitⅡ
两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用 T4DNA连接酶
T4DNA连接酶
（填“E•coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。（4）转化前需用
Ca2+
Ca2+
处理大肠杆菌细胞，使其处于 感受态
感受态
，以提高转化效率。将转化后的大肠杆菌接种在含 氨苄青霉素
氨苄青霉素
的培养基上进行培养。【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】总RNA；逆转录；耐高温；RNA聚合酶；准确进行复制；磷酸二酯键；EcoRⅠ；PvitⅡ；T4DNA连接酶；Ca2+；感受态；氨苄青霉素
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/5 5:0:8组卷：18引用：2难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
