研究表明，服用α-干扰素在慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤的治疗中有一定疗效。人参是一种名贵药材，具有较好的滋补作用。限制酶的发现为DNA的切割和功能基因的获得创造了条件。限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ的识别序列及切割位点分别为↓GATC、G↓AATTC、C↓GATCC。含干扰素基因的DNA片段如图1所示，图2为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程图，①～④表示相关的操作。请回答下列问题：
（1）结合上图，在构建基因表达载体时，为克服目的基因和农杆菌Ti质粒的自身环化以及目的基因与质粒的任意连接等，应选择用限制酶 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ处理含某目的基因的DNA和质粒。
（2）DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是 磷酸二酯键磷酸二酯键。
（3）图2操作①常利用PCR技术获取和扩增干扰素基因，除含有干扰素基因的DNA片段之外，该过程需要提供 4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）以及与干扰素基因两端两条模板链结合的两种引物。设计引物时，为了保证目的基因与质粒顺利连接，防止出现自身环化连接，需要在两种引物的一端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别序列 GAATTC和CGATCCGAATTC和CGATCC。
（4）图2步骤②除EcoRⅠ、BamHⅠ两种酶外，还需要用 DNA连接DNA连接酶。构建的基因表达载体除含有目的基因片段以外，还必须有 启动子和终止子启动子和终止子，以保证干扰素基因能在人参愈伤组织细胞中稳定存在和表达。同时，还应含有标记基因以便于 筛选含有重组DNA分子的受体细胞筛选含有重组DNA分子的受体细胞。
（5）图2操作④常用 抗原—抗体杂交抗原—抗体杂交技术检测干扰素基因是否成功表达出干扰素。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】EcoRⅠ和BamHⅠ；磷酸二酯键；4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）；GAATTC和CGATCC；DNA连接；启动子和终止子；筛选含有重组DNA分子的受体细胞；抗原—抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/6 8:0:9组卷：29引用：3难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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