野生茄子具有耐盐基因StP5CS。研究人员扩增StP5CS 基因并双酶切该基因和改造后的中间载体pCAMBIA1301，经DNA 连接酶连接酶切产物，最终得到下图1所示的植物表达载体pCAMBIA1301-StP5CS。将该植物表达载体导入植物细胞进而获得了耐盐植株。回答下列问题：
（1）提取茄子幼嫩叶片的总RNA，在 逆转录酶逆转录酶 的催化下合成cDNA，再通过PCR技术扩增StP5CS基因。PCR利用 DNA双链复制DNA双链复制 的原理。
（2）扩增StP5CS 基因的上游引物为 ZHPs：5'-CACATTTCTGCTCCTACATT-3'，下游引物为ZHPa：5'-CTTCCTAAATACACAACTGGAT-3'，两种引物中C+G 的比例保持一致主要是为了保证 引物与单链相应互补序列结合（复性）过程温度相近，引物与单链相应互补序列结合（复性）过程温度相近，。StP5CS基因PCR扩增的每次循环分为3步，在循环前常要进行一次94℃、5min预变性，其目的是 增加模板DNA彻底变性的概率（使模板DNA充分变性）增加模板DNA彻底变性的概率（使模板DNA充分变性）。
（3）构建耐盐基因StP5CS表达载体时，用限制酶BamHⅠ和SmaⅠ切割质粒pCAMBIA1301，15 min后需将温度从36℃升高至65℃左右并保温20min,目的是 使限制酶失活使限制酶失活，从而终止酶切反应。mRNA合成方向是5′→3′，图2是StP5CS基因示意图，为使其能正确插入表达载体并成功表达，则图中P处的碱基序列应为5'-CCCGGGCCCGGG-3'。
（4）若将该表达载体导入柑橘细胞中，常用 农杆菌转化农杆菌转化法，表达载体上的Ori可以保证其在柑橘细胞中能 自我复制自我复制。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录酶；DNA双链复制；引物与单链相应互补序列结合（复性）过程温度相近，；增加模板DNA彻底变性的概率（使模板DNA充分变性）；使限制酶失活；CCCGGG；农杆菌转化；自我复制
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/10 8:0:9组卷：7引用：3难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
