野生型甜玉米与普通玉米相比，可溶性糖向淀粉的转化较慢导致可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素。为提高甜玉米的生产应用价值，科研人员培育出了超量表达G蛋白转基因甜玉米。在超量表达G基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1、2所示。
（1）强启动子能被 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合，驱动基因持续转录。T-DNA在培育转基因甜玉米中的作用是 将强启动子和G基因带入甜玉米细胞并整合到甜玉米细胞染色体的DNA上将强启动子和G基因带入甜玉米细胞并整合到甜玉米细胞染色体的DNA上。为使DNA片段能定向插入T-DNA中，可用PCR技术在DNA片段的两端添加限制酶识别序列，M、N端添加的序列所对应的限制酶分别是 NotⅠ和SacⅠNotⅠ和SacⅠ。处理好的DNA片段与Ti质粒的重组过程共需要 33种酶。
（2）外植体经脱分化形成的愈伤组织放入农杆菌液浸泡后进行植物组织培养，培养基中需加入 潮霉素潮霉素进行筛选，获得玉米株系a1、a2、a3、a4。通过对四个株系的G蛋白表达量进行测定，发现a4株系的表达量与野生型相近，原因可能是 a4株系玉米中可能没有导入目的基因或目的基因未表达a4株系玉米中可能没有导入目的基因或目的基因未表达。
（3）真核基因的编码区含有内含子和外显子。图3为淀粉酶合成基因片段，其转录后形成的前体RNA需通过剪接（切去内含子对应序列）和加工后方能用于翻译。科研人员希望通过降低淀粉酶合成基因的表达，进一步提高甜玉米中可溶性糖的含量，将吗啉反义寡核苷酸（RNA剪接抑制剂）导入玉米受精卵中，发现其基因表达受阻。科研人员对它的具体作用提出两种假说。
假说1：导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪切；
假说2：导致RNA前体上外显子2的对应序列被剪切。
①为验证上述假说，分别从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取 总RNA总RNA，逆转录形成cDNA。若假说1成立，使用图示引物2和引物4进行PCR后电泳的结果为 ADAD（填字母）。
A.实验组有目的条带
B.实验组无目的条带
C.对照组有目的条带
D.对照组无目的条带
②若要证明假说2，需选择图示引物 3和43和4进行PCR。
【考点】基因工程的操作过程综合；植物的组织培养．
【答案】RNA聚合酶；将强启动子和G基因带入甜玉米细胞并整合到甜玉米细胞染色体的DNA上；NotⅠ和SacⅠ；3；潮霉素；a4株系玉米中可能没有导入目的基因或目的基因未表达；总RNA；AD；3和4
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/22 8:0:8组卷：41引用：3难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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