稻田生物固氮作用是稻田氮素循环的关键环节，某些蓝细菌是自生固氮菌（独立生活时能够利用空气中游离的氮分子作为氮源，并将氮分子转化为氨，氨转化为铵盐后是植物良好的氮素营养）。蓝细菌中B基因表达的B蛋白是一种有助于蓝细菌高效吸收的载体蛋白，科学家利用基因工程和细胞工程等技术，尝试将蓝细菌的B基因导入水稻细胞，以期获得吸收能力较强的转基因水稻，从而增加粮食产量。图1、2分别是农杆菌的T质粒和蓝细菌B基因的结构模式图。回答下列有关问题：

（1）为获得可用于进一步研究的固氮蓝细菌的菌株，该培养基所需的营养物质有无机碳源、

水、无机盐

水、无机盐

（写两种），但不需要添加

氮源

氮源

营养物质，并在有光条件下培养。
（2）利用PCR技术以图2中的DNA片段为模板扩增B基因时，需要的引物有

引物B和引物C

引物B和引物C

（填写图中引物代号）。
（3）在构建含B基因的表达载体时，需要用限制酶

BclⅠ和HindⅢ

BclⅠ和HindⅢ

切割Ti质粒和B基因，不选用其他限制酶的原因是

BamHⅠ会破坏四环素抗性基因（和氨苄青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti质粒

BamHⅠ会破坏四环素抗性基因（和氨苄青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti质粒

。实践中，双酶切与单酶切相比，优点是

防止质粒和目的基因的自身环化及质粒和目的基因的反向连接

防止质粒和目的基因的自身环化及质粒和目的基因的反向连接

。
（4）为检测B基因在转基因水稻细胞中是否成功表达，可采用抗原一抗体杂交法在分子水平上检测，还可以在个体水平上检测，请写出个体水平检测的实验思路：

将等量的生长状态相同的普通水稻和转基因水稻，分别置于含相同浓度的

NO

-

3

完全培养液中，在适宜条件下培养一段时间，检测并比较两组培养液中

NO

-

3

的剩余量（或测定两组水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

将等量的生长状态相同的普通水稻和转基因水稻，分别置于含相同浓度的

NO

-

3

完全培养液中，在适宜条件下培养一段时间，检测并比较两组培养液中

NO

-

3

的剩余量（或测定两组水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

。