铁皮石斛作为一种集观赏和药用价值于一身的重要中药材,在人们长期掠夺式采挖与生存条件的破坏下,野生资源濒临灭绝,药材价格不断攀升。现利用农杆菌介导的铁皮石斛遗传转化方法,不仅能上调植物有益成分表达水平,还能增强其抗逆性和抗病虫能力,同时还能控制其生长发育进程,以利市场需求。请回答下列问题:
(1)农杆菌的活化培养:挑取农杆菌于 液体液体(填“液体”或“固体”)培养基中活化并扩大培养,培养基中含有0.5%氯化钠,其作用是 调节渗透压(调节渗透压和提供无机盐营养)调节渗透压(调节渗透压和提供无机盐营养)。
(2)侵染石斛原球茎:挑选生长状态良好、颜色呈嫩绿色、质地均匀且较为松散的原球茎置于36-45khz条件下超声波处理1-3min,把原球茎切割为3-5mm方块,再对其进行 消毒消毒处理后浸入农杆菌侵染液。该过程中超声波和对原球茎进行切割处理的目的是 消毒超声波和切割处理造成球茎微损伤,有利于提高农杆菌的感染效率消毒超声波和切割处理造成球茎微损伤,有利于提高农杆菌的感染效率。
(3)共培养和筛选:侵染结束后,用滤纸吸干原球茎上多余侵染液,然后迅速将原球茎转移至共培养基培养;培养基中的蔗糖的作用是 提供碳源(提供碳源和维持渗透压)提供碳源(提供碳源和维持渗透压)。将共培养后的原球茎用 无菌水无菌水冲洗4-5次,再用浓度为480-520mg/L的头孢溶液清洗1-2min,将原球茎用滤纸吸干水分,迅速置于筛选培养基中培养。该过程中使用头孢类抗生素的作用是 无菌水杀灭农杆菌及其他杂菌无菌水杀灭农杆菌及其他杂菌。
(4)植株再生:将筛选得到的原球茎接种于筛选培养基中培养,待分化出芽后转入 生根培养基生根培养基中培养至组培苗,后要进行炼苗操作,炼苗目的是 提高试管苗对外部环境的适应能力提高试管苗对外部环境的适应能力。
(5)实验过程中用不同种类、浓度的激素对铁皮石斛原球茎形成愈伤组织和不定芽进行了研究,具体的实验结果如下表所示:
培养基号 | 培养基(MS) | 6-BA(mg/L) | 2,4-D(mg/L) | 蔗糖(g/L) | 接种数(个) | 原球茎死亡数(个) | 诱导愈伤组织数(个) | 每块愈伤不定芽数(个) |
1 | 12 | 0.5 | 1.2 | 30 | 30 | 5 | 25 | 3 |
2 | 12 | 1.0 | 1.5 | 20 | 30 | 4 | 26 | 3 |
3 | 12 | 1.25 | 0.8 | 25 | 30 | 3 | 27 | 11 |
4 | 32 | 0.5 | 1.5 | 25 | 30 | 6 | 24 | 3 |
5 | 32 | 1.0 | 0.8 | 30 | 30 | 4 | 26 | 7 |
6 | 32 | 1.25 | 1.2 | 20 | 30 | 3 | 27 | 5 |
3
3
号培养基,判断的依据是 接种相同数量的原球茎,原球茎死亡数低,诱导愈伤组织数和每块愈伤不定芽数高
接种相同数量的原球茎,原球茎死亡数低,诱导愈伤组织数和每块愈伤不定芽数高
。【答案】液体;调节渗透压(调节渗透压和提供无机盐营养);消毒;消毒超声波和切割处理造成球茎微损伤,有利于提高农杆菌的感染效率;提供碳源(提供碳源和维持渗透压);无菌水;无菌水杀灭农杆菌及其他杂菌;生根培养基;提高试管苗对外部环境的适应能力;3;接种相同数量的原球茎,原球茎死亡数低,诱导愈伤组织数和每块愈伤不定芽数高
【解答】
【点评】
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发布:2024/7/25 8:0:9组卷:38引用:1难度:0.5
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