研究者筛选到一株降解纤维素能力较强的枯草芽孢杆菌菌株(B菌),从中获得一种纤维素酶(C1酶)基因。将C1酶基因与高效表达载体(HT质粒)连接,再导入B菌,以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某条模板链互补的荧光探针,当Taq酶催化子链延伸至探针处,会水解探针,使荧光监测系统接收到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成。在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加。可通过荧光强度的变化监测产物量的变化从而得到一条荧光扩增曲线图(如图1)。

注:DNA的转录方向是RNA的合成方向,即5'端到3'端。
回答下列问题:
(1)启动子的基本组成单位是 脱氧核苷酸脱氧核苷酸,能识别启动子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
(2)荧光定量PCR仪能监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值),病毒核酸浓度越高,Ct值越 小小。
(3)“平台期”出现的最可能的原因是 试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加。
(4)图2中HT质粒酶切位点如图所示,C1酶基因以B链为转录模板链,克隆C1酶基因时在其酶切位点1和酶切位点2两端分别添加 BamHIBamHI和 SmaISmaI,并且二者顺序不能调换的原因是 转录时mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接转录时mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接。
(5)预期该工程菌在处理废弃物以保护环境方面可能的应用 降解桔杆,减少桔杆燃烧带来的空气污染降解桔杆,减少桔杆燃烧带来的空气污染。(举一例)
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】脱氧核苷酸;RNA聚合酶;小;试剂盒中的原料、引物和探针数量一定,超出一定循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加;BamHI;SmaI;转录时mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接;降解桔杆,减少桔杆燃烧带来的空气污染
【解答】
【点评】
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