尖孢镰刀菌会引起黄瓜枯萎病的发生。研究人员拟从土壤中分离筛选出对黄瓜枯萎病有抑制效果的拮抗细菌（jb9 菌株），以期为黄瓜枯萎病提供生物防治。实验过程如图1所示，回答下列问题：
（1）将土壤样品制成悬浮液，步骤Ⅰ使用的接种方法是 平板划线法平板划线法，纯化培养的关键是 无菌操作无菌操作。培养基 a 必备的营养物质有 碳源、氮源、水和无机盐碳源、氮源、水和无机盐。
（2）为验证jb9菌株的抑菌效果，需要先将尖孢镰刀菌均匀地接种在培养基 b 表面，则接种方法是 稀释涂布平板法稀释涂布平板法。滤纸组作为对照组，用 无菌水无菌水处理滤纸。
（3）jb9菌株能合成分泌真菌细胞壁降解酶（HCD），抑制尖孢镰刀菌（真菌）的生长。科研人员将获取的HCD基因导入黄瓜细胞，培育抗枯萎病的转基因植株。含HCD基因的DNA片段、质粒的结构及限制酶切割位点如图2所示。
①根据题意，将HCD基因与图示的质粒重组，应选用的限制酶是 BamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHIBamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHI。在筛选培养基上，要加入 氨苄青霉素氨苄青霉素来筛选含有HCD基因的受体细胞。将受体细胞培育后获得转基因植株。
②检测HCD基因成功表达真菌细胞壁降解酶（HCD）的方法技术是 抗原—抗体杂交技术抗原—抗体杂交技术。
（4）为将pIgR基因以正确方向插入质粒需要双酶切，这就要求在设计引物时，需在引物的5'端加入相应的酶切位点。已知a链为转录模板链，引物1的5'端酶切位点的碱基序列为GAATTC，则引物2的5'端酶切位点的碱基序列为 GCGGCCGCGCGGCCGC，理由是 a链为转录模板链，根据mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近启动子，应有NotⅠ的酶切位点a链为转录模板链，根据mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近启动子，应有NotⅠ的酶切位点。
【答案】平板划线法；无菌操作；碳源、氮源、水和无机盐；稀释涂布平板法；无菌水；BamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHI；氨苄青霉素；抗原—抗体杂交技术；GCGGCCGC；a链为转录模板链，根据mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近启动子，应有NotⅠ的酶切位点
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/31 8:0:9组卷：6引用：2难度：0.6
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1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数（如图所示），以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列叙述错误的是（ ）
发布：2024/12/31 4:0:1组卷：17引用：3难度：0.7 -
2．回答下列关于微生物的问题．
阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程．
（1）为获得单菌落，可采用平板划线法或法将初筛菌液接种在培养基上．46SM01菌落为粉白色，初期呈突起絮状，在显微镜下观察到，菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约1μm,初步推测为真菌，则其特征中，最能说明SM01是真菌的是有细胞核，且有分生孢子．SM01还一定具有的结构有（多选）．
A．细胞膜 B．核糖体 C．拟核 D．荚膜
（2）表中培养液pH均为6.0，若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定，则应选用表中的培养液，针对不选用的其他培养液，分别说明原因：
①缺少，SM01不能很好生长
②具有，会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果
③缺乏，会影响SM01的生长，也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定．
表 试验用培养液配方培养液 阿拉伯胶 阿拉伯胶酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4•7H2O KCl FeSO4•7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L发布：2025/1/2 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.5 -
3．为了防治大气污染，烟气脱硫是环保领域迫切需要解决的问题．研究人员为了获得用于烟气脱硫的脱硫细菌，并了解其生长规律，进行了如下操作．请回答下列问题：
（1）采样与细菌的筛选：在某热电厂烟囱周围区域要尽量做到采集土样．为确保能够从样品中分离到所需要的烟气脱硫细菌，可以通过增加脱硫菌的浓度．
（2）驯化脱硫细菌：将筛选出的脱硫细菌接种于有少量无菌水的三角瓶中，边搅拌边持续通入SO2气体几分钟，然后接种到培养基上，待长出菌落后再重复上述步骤，并逐步延长通SO2的时间，同时逐步降低培养基的pH．此操作的目的是分离出的脱硫细菌．
（3）培养与观察：一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），驯化后的脱硫细菌表现出稳定的特征．用高倍显微镜（填“可以”或“不可以”）观察到脱硫细菌的核糖体．
（4）探究生长规律：在计数时，计数方法有稀释涂布平板法和直接计数法．在用稀释涂布平板法进行计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的；通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，通常推测统计的菌落数往往比活菌的实际数目．发布：2025/1/1 8:0:2组卷：6引用：2难度：0.5
