β-胡萝卜素可在人体内转化为维生素A．普通水稻胚乳细胞中不含β-胡萝卜素，科研人员利用基因工程技术培育富含β-胡萝卜素的第一代“黄金大米”。
（1）培育第一代“黄金大米”时，需要将八氢番茄红素合成酶（psy）基因和胡萝卜素脱饱和酶（crtⅠ）基因转入普通水稻，图1示所需构建的重组Ti质粒中的重组T-DNA片段。
①要粗提取含psy基因、crtⅠ基因的DNA时，利用了DNA分子的 不溶于酒精、在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同不溶于酒精、在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同物理性质。
②利用PCR扩增psy基因、crtⅠ基因时，需要通过控制 温度温度的方法使DNA复制在体外反复进行。常采用 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR产物。
③据图分析，构建重组T-DNA片段时，依次用限制酶 I-SecⅠ、KpnⅠI-SecⅠ、KpnⅠ和DNA连接酶处理，将psy基因和crtⅠ基因、潮霉素抗性基因接入。
④通过农杆菌转化法，上述重组Ti质粒可以将该T-DNA片段导入水稻细胞并 整合到染色体DNA上整合到染色体DNA上。农杆菌纯化培养，常用 平板划线和稀释涂布平板平板划线和稀释涂布平板方法将单个农杆菌分散在固体培养基上。
（2）已知潮霉素对原核细胞和真核细胞的生长都有抑制作用，据此分析重组T-DNA片段中接入潮霉素抗性基因的作用是 筛选转入重组T-DNA的农杆菌和含重组T-DNA的水稻筛选转入重组T-DNA的农杆菌和含重组T-DNA的水稻。
（3）重组T-DNA片段中启动子 22是水稻种子的胚乳细胞特异性表达的启动子。
（4）如图2示第一代“黄金大米”中细胞内β-胡萝卜素的合成途径。经检测发现其细胞内β-胡萝卜素含量不够高，是八氢番茄红素含量较低造成的。据此信息可采取 对psy基因进行诱变或定向改造（从其他生物中筛选），获得表达产物活性更高的psy基因，进行转基因操作对psy基因进行诱变或定向改造（从其他生物中筛选），获得表达产物活性更高的psy基因，进行转基因操作措施，以便获得β-胡萝卜素含量更高的第二代“黄金大米”。
【答案】不溶于酒精、在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；温度；琼脂糖凝胶电泳；I-SecⅠ、KpnⅠ；整合到染色体DNA上；平板划线和稀释涂布平板；筛选转入重组T-DNA的农杆菌和含重组T-DNA的水稻；2；对psy基因进行诱变或定向改造（从其他生物中筛选），获得表达产物活性更高的psy基因，进行转基因操作
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/20 8:0:9组卷：6引用：2难度：0.8
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
