科研人员培育了一种能够降解餐厨废弃物并生成乳酸的转基因毕赤酵母。基本思路是在乳酸脱氢酶基因（LDH）的单基因表达载体中逐个接入糖化酶基因（Ga）表达盒与α-淀粉酶基因（Amy）表达盒，构建出AGL—三基因表达载体，如图1所示。
（1）利用PCR技术获得目的基因的过程中，需要在PCR反应体系中加入模板、Taq酶及 引物和四种游离的脱氧核苷酸引物和四种游离的脱氧核苷酸。
（2）将图1所示结构“导入”毕赤酵母后，将毕赤酵母转移至含 博来霉素博来霉素的培养基中进行培养，筛选出能够生存的菌落。
（3）对筛选出的菌株进行个体水平鉴定的方法是 将其接种至餐厨废弃物中，定时测定乳酸的含量将其接种至餐厨废弃物中，定时测定乳酸的含量，利用转基因毕赤酵母降解餐厨废弃物生成乳酸，优点有 既减少了环境污染，也降低了乳酸的生产成本既减少了环境污染，也降低了乳酸的生产成本。
（4）构建三基因表达载体的难点在于构建目的基因的表达盒，图2为Amy表达盒的构建过程。（pro为启动子；AOX TT为终止子；Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、BglⅡ、BamHⅠ为不同限制酶，①②为操作过程。）操作①的处理是 将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种限制酶处理将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种限制酶处理，然后用DNA连接酶拼接。在此之前，科研人员还利用点突变技术对α-淀粉酶基因序列进行了同义密码子替换（即不影响氨基酸序列）改造，推测其原因是 α-淀粉酶基因序列中含有所用限制酶的识别序列α-淀粉酶基因序列中含有所用限制酶的识别序列。操作②中必需用 BglⅡ、BamHⅠBglⅡ、BamHⅠ酶对质粒2处理，才能获得能正常表达的α-淀粉酶基因表达盒。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】引物和四种游离的脱氧核苷酸；博来霉素；将其接种至餐厨废弃物中，定时测定乳酸的含量；既减少了环境污染，也降低了乳酸的生产成本；将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种限制酶处理；α-淀粉酶基因序列中含有所用限制酶的识别序列；BglⅡ、BamHⅠ
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/10 8:0:9组卷：24引用：3难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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