大豆凝集素（L）具有防御病害的功能，该蛋白存在于大豆种子的子叶中。研究人员尝试利用蛋白L的特性构建抗病毒马铃薯，进行了以下实验。
（1）从大豆抗病品种中获取L基因，通过PCR的方法在基因两侧引入限制酶酶切位点，根据图1中T-DNA的结构，引入适宜的酶切位点是 XbaⅠ和SmaⅠXbaⅠ和SmaⅠ。通过 农杆菌转化农杆菌转化法将酶切、连接产物导入马铃薯细胞，获得多株转基因抗病马铃薯。
（2）为研究转基因马铃薯抗病毒植株的分子机理，研究人员利用Taqman探针和反转录PCR技术，对转基因马铃薯多种防卫反应基因的表达进行检测：
①提取抗病植株叶片细胞的 总mRNA总mRNA进行反转录，获取cDNA．
②设计各种防卫基因的引物，利用图2所示的原理进行PCR。Taqman探针的结构如图所示，由于 探针有可以碱基互补配对的片段探针有可以碱基互补配对的片段，游离探针上的荧光素会与淬灭剂结合无法发出荧光。在PCR过程中，Taq酶体现出 5'→3'聚合酶与5'→3'外切酶5'→3'聚合酶与5'→3'外切酶两种酶活性，在相同扩增时间中，总荧光值与 待测基因的mRNA（转录）量待测基因的mRNA（转录）量成正比。
③经检测，转基因马铃薯水杨酸（SA）信号通路相关蛋白基因表达量显著上升，SA是一种植物抗病有关的调节物质。研究人员推测L仪器检测通过激活SA途径提升抗病能力，欲验证这一假设，需要进行的实验是 敲除SA受体基因或抑制SA信号途径，检测转基因马铃薯的抗病情况敲除SA受体基因或抑制SA信号途径，检测转基因马铃薯的抗病情况。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】XbaⅠ和SmaⅠ；农杆菌转化；总mRNA；探针有可以碱基互补配对的片段；5'→3'聚合酶与5'→3'外切酶；待测基因的mRNA（转录）量；敲除SA受体基因或抑制SA信号途径，检测转基因马铃薯的抗病情况
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：5引用：3难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
