回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）从水稻体细胞中提取总RNA，利用 逆转录逆转录酶获得B基因编码蛋白的序列，将该序列和Luc基因（表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光）连接成的融合基因必须连接到表达载体的启动子和终止子之间，其中启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶的结合位点。
（2）将重组载体导入农杆菌时，常用氯化钙处理农杆菌的目的是 增加农杆菌细胞壁的通透性增加农杆菌细胞壁的通透性。处理后再将农杆菌转移到适宜培养液中培养一段时间，目的是 使农杆菌恢复正常生理状态使农杆菌恢复正常生理状态。
（3）过程②利用了农杆菌的T-DNA片段，将目的基因 整合（或转移）整合（或转移）到受体细胞的染色体DNA上，完成后需在培养基中添加 潮霉素潮霉素对水稻愈伤组织进行脱菌处理。
（4）借助Luc基因的表达来完成第二次鉴定筛选，具体方法是 检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光。
（5）在植物克隆中，尽量选择 性状优良、细胞全能性表达充分性状优良、细胞全能性表达充分的基因型。有研究人员将上述水稻愈伤组织反复扩增后再诱导，都以失败告终，原因是在 多次继代培养多次继代培养后丧失细胞全能性的表达能力。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；RNA聚合酶；增加农杆菌细胞壁的通透性；使农杆菌恢复正常生理状态；整合（或转移）；潮霉素；检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光；性状优良、细胞全能性表达充分；多次继代培养
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/27 11:0:2组卷：2引用：2难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
