生长素参与植物生长发育的调节，生长素运输蛋白（PINI）对IAA的极性运输具有重要作用。为研究35S启动子（一种来自病毒的强启动子）能否引起下游基因的过量表达，研究人员将35S启动子与PINI基因转入拟南芥，观察PINI过量表达对植物的影响。
（1）获取PINI基因的mRNA后，通过RTPCR扩增获取PINI基因（DNA）时所需要的酶是 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶。每次PCR循环分为3步，其中所需温度最低的一步称为 复性复性。
（2）PINI基因不能直接导入受体细胞，需要构建PINI表达载体。构建PINI表达载体的目的是 保证PINI在受体细胞中稳定存在和表达保证PINI在受体细胞中稳定存在和表达。
（3）为将PINI基因以正确方向插入质粒需要双酶切。在设计引物时，需在引物的5'端加入相应的酶切位点。据图1分析，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是 EcoRⅠ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ。
（4）提取转基因拟南芥的DNA，用相应引物扩增出35S启动子和PINI基因，为检测目的基因是否导入拟南芥，应电泳检测扩增产物中的 35S35S，不检测另一种的原因是 启动子启动子。据图2可知，也可在个体水平上进行检测，方法是 本实验的目的是要探究PINI过量表达对植物的影响，因此需要首先确定35S是否存在使用除草剂来检测转基因植物对除草剂的抗性本实验的目的是要探究PINI过量表达对植物的影响，因此需要首先确定35S是否存在使用除草剂来检测转基因植物对除草剂的抗性。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶；复性；保证PINI在受体细胞中稳定存在和表达；EcoRⅠ和PstⅠ；35S；启动子；本实验的目的是要探究PINI过量表达对植物的影响，因此需要首先确定35S是否存在使用除草剂来检测转基因植物对除草剂的抗性
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/20 8:0:9组卷：6引用：2难度：0.5
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
