大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如图。分析回答下列问题：
（1）PCR扩增sGFP的原理是 DNA复制DNA复制，该过程需要根据 sGFP两端的核苷酸序列sGFP两端的核苷酸序列设计特异性引物序列，在PCR反应体系中，添加的dNTP可提供 原料和能量原料和能量。
（2）由图可知：为保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达，需将sGFP插入 构巢曲霉启动子和终止子构巢曲霉启动子和终止子之间。
（3）图中b链的黏性末端碱基序列（5'→3'）为 AGCTAGCT。
（4）过程②需要的工具酶是 DNA连接酶DNA连接酶。
（5）过程③中需要配制细菌培养基，配制时要在培养基灭菌并冷却到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能与培养基一同灭菌的原因是 潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏。用该培养基筛选培养农杆菌，得到多个菌落，提取全部细菌质粒DNA，用BamHⅠ和HindⅢ完全酶切，可以得到 33种长度不同的DNA片段。
（6）将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测 大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA复制；sGFP两端的核苷酸序列；原料和能量；构巢曲霉启动子和终止子；AGCT；DNA连接酶；潮霉素在高温灭菌时结构会被破坏；3；大丽轮枝菌细胞中绿色荧光的强度
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/12 6:0:10组卷：52引用：4难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
