肿瘤已成为严重危害人类健康的高发病,主要的治疗手段有化疗、放疗和手术等,而肿瘤细胞对肿瘤药物产生耐药性是化疗失败的主要原因之一,研究表明肿瘤细胞耐药性的产生与过量表达的跨膜转运蛋白BCRP有关,研究人员尝试建立稳定表达BCRP的细胞系。回答下列问题:
(1)研究人员从人的 癌细胞癌细胞(填“普通体细胞”或“癌细胞”)中提取总RNA,逆转录后进行PCR扩增获得大量BCRP基因。
(2)随后构建BCRP基因的真核表达载体,研究人员选择了P质粒作为载体,因为其具有:能被真核细胞识别的启动子,其作用是 RNA聚合酶识别和结合位点RNA聚合酶识别和结合位点;抗新霉素基因的作用是 便于将含目的基因的细胞筛选出来便于将含目的基因的细胞筛选出来。
(3)通常用两种酶切割P质粒和BCRP基因的原因是 避免目的基因和载体自身环化或反向连接避免目的基因和载体自身环化或反向连接,将表达载体导入受体细胞的方法是 显微注射法显微注射法,该过程的变异类型是 基因重组基因重组。
(4)通过筛选获得抗新霉素的受体细胞,并对其进行多次检测,最终获得能高效表达BCRP的细胞,在培养液中培养一段时间后分瓶进行 传代传代(填“原代”或“传代”)培养,最终获得稳定的细胞系,推测此细胞系在后续研究中的用途有 研究能阻止BCRP过量表达的药物研究能阻止BCRP过量表达的药物(写出1点)。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】癌细胞;RNA聚合酶识别和结合位点;便于将含目的基因的细胞筛选出来;避免目的基因和载体自身环化或反向连接;显微注射法;基因重组;传代;研究能阻止BCRP过量表达的药物
【解答】
【点评】
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发布:2024/7/13 8:0:9组卷:1引用:2难度:0.6
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