科研人员获取了PHB2蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),利用基因工程的方法使大肠杆菌表达该蛋白,以便进一步检测PHB2蛋白抑制肿瘤细胞增殖和扩散的效果。如图1是phb2基因编码区序列以及两端需添加的、能被相关酶识别的序列,图2为研究所用表达载体示意图,表格为有关的限制酶种类及识别序列和切割位点。回答下列问题:

限制酶种类 | SpeⅠ | PvitⅡ | BamHⅠ | XbaⅠ |
识别序列 | 5'A↓CTAGT3′ | 5'CAG↓CTG3′ | 5'G↓GATCC3′ | 5'T↓CTAGA3′ |
5'端
5'端
(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶识别序列。据图可推断,扩增α链时需添加的限制酶识别序列以及所用引物的碱基序列是5'CAGCTGTCATTT
CAGCTGTCATTT
3'。已知AUG为PHB2蛋白合成的起始密码子,则构建符合要求的表达载体所用的工具酶有PvitⅡ、XbaⅠ、T4DNA连接酶
XbaⅠ、T4DNA连接酶
。(2)将符合要求的基因表达载体导入工程菌后,可用
抗原—抗体杂交
抗原—抗体杂交
技术检测PHB2蛋白是否合成,通过提取、分离和纯化,从发酵液中获得该蛋白。为防止PHB2蛋白在工程菌细胞中被降解,在发醉过程中应选用 蛋白酶
蛋白酶
缺陷型工程菌作为受体细胞,且在发酵结束后的纯化过程中应添加蛋白酶抑制剂。(3)肿瘤细胞通常培养在
95%的空气和5%的CO2
95%的空气和5%的CO2
(气体及比例)的恒温培养箱中,将适量PHB2蛋白加入培养液后,若肿瘤细胞 增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
,则表明该蛋白具有抑制肿瘤细胞增殖和扩散作用,据此可进一步地深入研究。【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】5'端;CAGCTGTCATTT;XbaⅠ、T4DNA连接酶;抗原—抗体杂交;蛋白酶;95%的空气和5%的CO2;增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
【解答】
【点评】
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