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科研人员获取了PHB2蛋白的基因编码序列(简称phb2基因),利用基因工程的方法使大肠杆菌表达该蛋白,以便进一步检测PHB2蛋白抑制肿瘤细胞增殖和扩散的效果。如图1是phb2基因编码区序列以及两端需添加的、能被相关酶识别的序列,图2为研究所用表达载体示意图,表格为有关的限制酶种类及识别序列和切割位点。回答下列问题:

限制酶种类 SpeⅠ PvitⅡ BamHⅠ XbaⅠ
识别序列 5'ACTAGT3′ 5'CAGCTG3′ 5'GGATCC3′ 5'TCTAGA3′
(1)在利用PCR扩增phb2基因时,为了使PCR产物能被限制酶切割,以便构建基因表达载体,可以考虑在引物的
5'端
5'端
(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶识别序列。据图可推断,扩增α链时需添加的限制酶识别序列以及所用引物的碱基序列是5'
CAGCTGTCATTT
CAGCTGTCATTT
3'。已知AUG为PHB2蛋白合成的起始密码子,则构建符合要求的表达载体所用的工具酶有PvitⅡ、
XbaⅠ、T4DNA连接酶
XbaⅠ、T4DNA连接酶

(2)将符合要求的基因表达载体导入工程菌后,可用
抗原—抗体杂交
抗原—抗体杂交
技术检测PHB2蛋白是否合成,通过提取、分离和纯化,从发酵液中获得该蛋白。为防止PHB2蛋白在工程菌细胞中被降解,在发醉过程中应选用
蛋白酶
蛋白酶
缺陷型工程菌作为受体细胞,且在发酵结束后的纯化过程中应添加蛋白酶抑制剂。
(3)肿瘤细胞通常培养在
95%的空气和5%的CO2
95%的空气和5%的CO2
(气体及比例)的恒温培养箱中,将适量PHB2蛋白加入培养液后,若肿瘤细胞
增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
,则表明该蛋白具有抑制肿瘤细胞增殖和扩散作用,据此可进一步地深入研究。

【答案】5'端;CAGCTGTCATTT;XbaⅠ、T4DNA连接酶;抗原—抗体杂交;蛋白酶;95%的空气和5%的CO2;增殖速率减慢(或数量减少)、细胞膜上的糖蛋白减少
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/4 8:0:5组卷:9引用:2难度:0.6
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    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以从基因文库中获得。基因文库包括
     
     

    (2)生物体细胞内的DNA复制开始时,解开DNA双链的酶是
     
    。在体外利用PCR技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是
     
    。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的
     

    (3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶,常见的有
     
     
    ,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
     
    。当几丁质酶基因和质粒载体连接时,DNA连接酶催化形成的化学键是
     

    (4)提取RNA时,提取液中需添加RNA酶抑制剂,其目的是
     

    (5)若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌病的能力没有提高,根据中心法则分析,其可能的原因是
     

    发布:2025/1/5 8:0:1组卷:2引用:2难度:0.6
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