人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory syncytial virus,HRSV)是一种单链RNA病毒,如图1是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图,相关限制酶的识别序列及切割位点为:BclⅠ(T↓GATCA)、EcoRⅠ(G↓AATTC)、XbaⅠ(T↓CTAGA)、Sau3AⅠ(↓GATC)、BamHⅠ(G↓GATCC),请据图回答:
(1)HRSV的基因组为-RNA,入侵细胞后在 RNA复制酶RNA复制酶的催化下合成+RNA。被HRSV侵染的人体组织中易观察到“多核细胞”的现象,请解释此现象的可能成因 HRSV诱导了人体组织细胞的融合HRSV诱导了人体组织细胞的融合。此现象被科学家发现并应用于 单克隆抗体制备单克隆抗体制备(技术)。
(2)在RT-PCR中添加的某逆转录酶能实现从单链RNA到双链cDNA的合成过程,试推测该逆转录酶具有 ①②③①②③(①依赖于RNA的DNA聚合酶活性②RNaseH(RNA酶)活性③依赖于DNA的DNA聚合酶活性)等多种活性。HIV的逆转录酶还有DNA内切酶活性,试推测这可能与HIV侵染后 基因整合到宿主细胞染色体DNA,随宿主DNA同步复制而稳定遗传基因整合到宿主细胞染色体DNA,随宿主DNA同步复制而稳定遗传(生理过程)有关。
(3)过程③需要用 XbaⅠ、BclⅠXbaⅠ、BclⅠ两种酶切割质粒A。过程②设计引物时在两种引物的5'端分别添加 XbaⅠ、BamHⅠXbaⅠ、BamHⅠ两种酶的识别序列,酶切位点一般不能添加在引物的3'端的主要原因是 使引物的3端与模板链严格互补配对,保证子链的延伸使引物的3端与模板链严格互补配对,保证子链的延伸。
(4)为制备减毒突变株,科研人员将单个突变碱基引入HRSV基因组cDNA质粒克隆中,流程如图2。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰,通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。
①DpnI识别甲基化的GATC四个碱基序列,因此其能将图中的 a、b链a、b链链水解消化掉,以留下带突变碱基DNA链,其上缺刻(缝隙)在大肠杆菌细胞内完成的修复需要 DNA连接酶DNA连接酶酶。
②若已知质粒B为a个,经过程①扩增15个循环,需要突变引物 15a15a个,将过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制n轮,得到双链突变的DNA 15a-2n-115a-2n-1个。
【考点】中心法则及其发展;DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】RNA复制酶;HRSV诱导了人体组织细胞的融合;单克隆抗体制备;①②③;基因整合到宿主细胞染色体DNA,随宿主DNA同步复制而稳定遗传;XbaⅠ、BclⅠ;XbaⅠ、BamHⅠ;使引物的3端与模板链严格互补配对,保证子链的延伸;a、b链;DNA连接酶;15a;15a-2n-1
【解答】
【点评】
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发布:2024/8/29 6:0:11组卷:13引用:2难度:0.6
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