甘蓝型油菜中，抑制PEP基因的表达可提高油菜籽的含油量。通过基因工程将PEP基因反向连接在启动子后，构建转反义PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技术路径。如图为PEP基因及Ti质粒的结构示意图。
（1）利用PCR技术扩增PEP基因需要一对特异性引物，所用引物的作用是 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。
（2）为将PEP基因反向连接在启动子后，需要在PEP基因的上游引物和下游引物的 5′端5′端（填“3′端”或“5′端”）分别引入 ScaScaⅠ、BamHⅠScaScaⅠ、BamHⅠ酶的识别序列。
（3）为检测反义PEP基因是否进入细胞，研究者通常检测细胞中是否存在ntp基因，而不检测PEP基因，其原因是 油菜细胞的基因组中含有PEP基因油菜细胞的基因组中含有PEP基因。
（4）构建转反义PEP基因油菜过程中，需要将PEP基因反向连接在启动子后，原因是 PEP基因反向插入，转录出的RNA才能与原有PEP基因转录出的mRNA形成互补双链，抑制PEP基因的翻译过程PEP基因反向插入，转录出的RNA才能与原有PEP基因转录出的mRNA形成互补双链，抑制PEP基因的翻译过程。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸；5′端；ScaScaⅠ、BamHⅠ；油菜细胞的基因组中含有PEP基因；PEP基因反向插入，转录出的RNA才能与原有PEP基因转录出的mRNA形成互补双链，抑制PEP基因的翻译过程
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/21 8:0:9组卷：6引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
