除草剂的有效成分草甘膦能够专一性地抑制EPSP合酶的活性，从而使植物体内多种代谢途径受到影响而导致植物死亡，并且这种作用没有选择性，在除去杂草的同时也会影响农作物的生长。科学家将能够降解草甘膦的基因导入大豆体内，培育出了抗除草剂的转基因大豆。请回答下列问题：
（1）将抗除草剂基因转入大豆体内时常用的“分子工具”有限制性内切核酸酶、DNA连接酶DNA连接酶和载体三种，在构建基因表达载体时往往需要用同一种限制酶切割目的基因和载体，其原因是 使目的基因和载体产生相同的黏性末端，利于目的基因与载体连接使目的基因和载体产生相同的黏性末端，利于目的基因与载体连接。
（2）获取目的基因后需要利用PCR扩增技术获得大量的目的基因，在PCR反应的缓冲液中往往需要加入耐高温的DNA聚合酶，其理由是 PCR利用高温使DNA双链解开PCR利用高温使DNA双链解开。
（3）基因表达载体除了含有目的基因、启动子和终止子外还必须有 标记基因、复制原点标记基因、复制原点（至少答出两点），将目的基因导入受体细胞常用的方法有 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法（答出一种即可）。
（4）目的基因导入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，需要检测和鉴定，请从个体水平上提出鉴定抗除草剂大豆是否培育成功的措施 思路：用草甘膦同时喷洒转基因大豆，观察其存活情况 预测结果：转基因大豆存活 结论：降解草甘膦的基因在大豆细胞中稳定维持和成功表达思路：用草甘膦同时喷洒转基因大豆，观察其存活情况 预测结果：转基因大豆存活 结论：降解草甘膦的基因在大豆细胞中稳定维持和成功表达（写出简单的思路并预测结果及结论）。
（5）将抗除草剂基因导入大豆后培育的转基因大豆往往会引起基因污染，若将玉米体内的一种α-淀粉酶与抗除草剂基因一起转入大豆中可以避免基因污染，其原因是 玉米体内的α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性玉米体内的α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA连接酶；使目的基因和载体产生相同的黏性末端，利于目的基因与载体连接；PCR利用高温使DNA双链解开；标记基因、复制原点；农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；思路：用草甘膦同时喷洒转基因大豆，观察其存活情况 预测结果：转基因大豆存活 结论：降解草甘膦的基因在大豆细胞中稳定维持和成功表达；玉米体内的α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/19 8:0:9组卷：4引用：1难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
