图中甲表示含目的基因的DNA片段，图乙表示质粒（已知PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种限制酶切割后产生的黏性末端都不相同）。请回答下列问题：
（1）已知DNA的合成方向总是从子链的5'端向3'端延伸。利用PCR技术以图甲中的DNA片段为模板扩增目的基因，需要的引物有 B、CB、C（从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性（90～95℃），低温复性（55～60℃）、适温延伸（70～75℃）三个步骤构成一个循环，为使得DNA聚合酶能够重复利用，选用的酶应在 90～9590～95℃处理后仍然具备催化活性。
（2）要保证目的基因能与图乙中的质粒准接，要将（1）中选出的两种引物的5'端分别添加 PstⅠPstⅠ、EcoRⅠEcoRⅠ两种限制酶的识别序列。在此基础上，对扩增的目的基因和质粒都用这两种限制酶处理，待基因表达载体构建完成后，加入含大肠杆菌的转化液中。含该重组质粒的大肠杆菌单菌落 不能不能（填“能”或者“不能”）在含青霉素培养基存活。
（3）若要将重组质粒导入大肠杆菌，则一般先要用Ca2+处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌处于一种 吸收周围环境中DNA分子吸收周围环境中DNA分子生理状态。
（4）基因工程的应用十分广阔，可用转基因牛制作乳腺生物反应器，从乳汁中提取药物，则该操作过程中选择的受体细胞是 牛的受精卵牛的受精卵，原因是 动物受精卵具有全能性动物受精卵具有全能性。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】B、C；90～95；PstⅠ；EcoRⅠ；不能；吸收周围环境中DNA分子；牛的受精卵；动物受精卵具有全能性
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/7 8:0:9组卷：9引用：2难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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