人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。
（1）图中启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶识别和结合位点，且启动子是具有方向性的，目的基因只有正确插入启动子和终止子之间才能正确表达。在表达载体中绿色荧光蛋白基因作为 标记基因标记基因，要使其成功表达，图b中还缺启动子，请判断即将插入的启动子方向 向左向左（填“向左”或“向右”）。
（2）利用PCR技术扩增γ基因上游不同DNA片段的原理是 DNA双链复制DNA双链复制，为使PCR反应体系中的模板解链为单链，需要满足的条件是 加热至90-95℃加热至90-95℃。
（3）将扩增后的产物定向插入载体指导绿色荧光蛋白基因表达，需要在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在R末端添加的序列所对应的限制酶应为 EcoRIEcoRI，在F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是 SalISalI。
（4）从产物扩增到载体构建完成的整个过程中，除限制酶外，还必须用到的工具酶有DNA连接酶和 耐高温的DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶。
（5）将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，成功转化后，含F1～F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是 F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。
（6）向培养液中添加适量的雌激素，含F1～F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5～F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCL11A蛋白结合位点位于 引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上。
【答案】RNA聚合酶；标记基因；向左；DNA双链复制；加热至90-95℃；EcoRI；SalI；耐高温的DNA聚合酶；F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达；引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上
【解答】
【点评】
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