科研人员克隆了猪白细胞抗原基因（SLA-2基因），构建了该基因的真核表达载体，进行了猪肾上皮细胞表达研究。实验的主要流程如下，SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,其限制酶切点后的数字表示距复制原点的距离。可能用到的限制酶识别序列和切割位点如下表所示。
| 限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ |
| 识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
（1）过程①中，PCR扩增SLA-2的原理是
DNA（半保留）复制
DNA（半保留）复制
，下列4种引物中应选择的是 引物a和引物b
引物a和引物b
。引物a：5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b：5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c：5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d：5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
（2）过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是
扩增重组质粒
扩增重组质粒
，该过程需要用 Ca2+
Ca2+
处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。然后将大肠杆菌涂布在含有 氨苄青霉素
氨苄青霉素
（抗生素）的培养基上培养。（3）若用限制酶Sau3AⅠ和XbaⅠ完全切割质粒B和质粒C后电泳，请在图3中画出预测的电泳结果
（4）科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选，嘌呤霉素对细胞的毒性实验结果如图，根据实验结果最佳的嘌呤霉素筛选浓度为
80μg/mL
80μg/mL
，原因是 既让没有抗性的细胞死亡，又不会杀死有抗性的细胞
既让没有抗性的细胞死亡，又不会杀死有抗性的细胞
。（5）筛选产SLA-2抗原肽的猪肾上皮细胞的方法是
用抗SLA-2抗原肽的抗体进行抗原—抗体杂交法筛选
用抗SLA-2抗原肽的抗体进行抗原—抗体杂交法筛选
。【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】DNA（半保留）复制；引物a和引物b；扩增重组质粒；Ca2+；氨苄青霉素；；80μg/mL；既让没有抗性的细胞死亡，又不会杀死有抗性的细胞；用抗SLA-2抗原肽的抗体进行抗原—抗体杂交法筛选
；80μg/mL；既让没有抗性的细胞死亡，又不会杀死有抗性的细胞；用抗SLA-2抗原肽的抗体进行抗原—抗体杂交法筛选【解答】
【点评】
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发布：2024/6/6 8:0:9组卷：11引用：2难度：0.5
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