采矿污染和不当使用化肥导致重金属镉（Cd）在土壤中过量积累。利用植物修复技术将土壤中的Cd富集到植物体内，进行后续处理（例如，收集植物组织器官异地妥善储存），可降低土壤中Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复能力，研究者将酵母液泡Cd 转运蛋白（YCF1）（其基因序列内含有1个↓GATC一序列）基因导入受试杨树，并检测了相关指标。回答下列问题：
（1）通过生物信息学分离得到的YCF1基因可通过PCR进行扩增，扩增过程中DNA聚合酶具有

热稳定性

热稳定性

的特点，某次PCR扩增产物电泳结果显示：实验组和对照组都没有任何条带，从引物角度分析可能的原因有

引物特异性差

引物特异性差

。
（2）利用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用

BclⅠ和SmaⅠ

BclⅠ和SmaⅠ

酶切割质粒，酶切后的载体和目的基因片段，通过

DNA连接

DNA连接

酶作用后获得重组质粒。转入了重组质粒的受体菌，在分别含有四环素和氨苄青霉素的培养基中的生长情况分别为

存活、死亡

存活、死亡

，从平板上长出的菌落中提取质粒利用Sau3AⅠ进行酶切，最多可以得到

3

3

种大小不同的DNA片段。

限制酶	BamHⅠ	XmaⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
识别序列及切割位点	-G↓GATCC-	-C↓CCGGG-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

（3）进行前期研究时，将含有YCF1基因的

重组载体

重组载体

导入大肠杆菌。研究者进一步获得了转YCF1基因的雄性不育杨树株系，采用不育株系作为实验材料的目的是

避免目的基因在自然界中的扩散

避免目的基因在自然界中的扩散

。