伪狂犬病与乙脑在我国猪群中广泛存在，对养猪业的持续发展造成巨大的经济损失。为此，研究人员拟以伪狂犬病毒为载体，构建乙脑病毒主要免疫原性基因PrM重组病毒，为研究猪乙脑病毒与伪狂犬病毒双价基因工程疫苗奠定基础。下图表示表达乙脑病毒PrM基因重组伪狂犬病病毒的构建过程，PK、gG、gD为伪狂犬病的主要抗原基因，TK为伪狂犬病的毒性基因，pgG为启动子，BamHⅠ和EcoRⅠ为两种限制酶。请分析回答：

（1）催化过程①的酶有

反转录酶、Taq酶

反转录酶、Taq酶

，RT-PCR的进行应先设计针对PrM基因的特异性引物，下列可作为该过程的一对引物是

P1和P4

P1和P4

。
P1：5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3'
P2：5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3'
P3：5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3'
P4：5'GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3'
（2）过程②在

DNA连接

DNA连接

酶的作用下可形成重组转移载体，研究人员通过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后再电泳的方法进行重组转移载体的鉴定筛选，请在图2中画出通用转移载体和重组转移载体酶切并电泳后条带的大致位置。
（3）研究发现，伪狂犬病毒在细胞中增殖的非必需基因占病毒基因组的一半以上，因此，以该病毒为载体的优势体现在

插入外源基因的区域多而不影响其本身的繁殖

插入外源基因的区域多而不影响其本身的繁殖

，过程③采用脂质体介导共转染PK-15细胞的原理是

细胞质膜的流动性

细胞质膜的流动性

。
（4）伪狂犬病毒缺失TK、gG等基因会显著降低毒力，但不会影响自身正常繁殖，故重组病毒理论上具有的特点是

能侵染宿主细胞但不具有致病性

能侵染宿主细胞但不具有致病性

，若检测重组病毒中PrM基因是否成功表达，可采用的方法是

抗原—抗体杂交

抗原—抗体杂交

。
（5）该重组病毒能否直接作为基因工程疫苗投入使用，还需要进一步探究。请你利用所学的知识简要写出实验设计思路：

给多只健康且生理状态相同的猪接种一定剂量的重组病毒，定期观察其生长情况并检测血浆中相应的抗体水平

给多只健康且生理状态相同的猪接种一定剂量的重组病毒，定期观察其生长情况并检测血浆中相应的抗体水平

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