某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因（AmpR基因）、LacZ基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如图所示。请根据以上信息回答下列问题。
（1）在第②步中，应选择用 相同相同（相同/不同）的限制酶或切割能产生相同末端的限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段。限制酶的切割位点 不能不能（能/不能）位于目的基因的内部，限制酶 不能不能（能/不能）破坏质粒的启动子、终止子、标记基因、复制原点等结构。
（2）在第③步中，为了使质粒DNA与目的基因能连接，还需要在混合物中加入 DNA连接酶DNA连接酶（限制酶/DNA连接酶）。
（3）选用含有AmpR基因和LacZ基因的质粒的原因：AmpR基因AmpR基因（AmpR基因/LacZ基因）可用于检测质粒是否导入了大肠杆菌。由于LacZ基因的效应，这些生长的菌落可能出现两种颜色：含有空质粒（没有连接目的基因的质粒）的大肠杆菌菌落呈 蓝色蓝色（蓝色/白色）；含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈 白色白色（蓝色/白色）。
（4）含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色的原因：目的基因的插入破坏了 LacZ基因的结构，使其不能正常表达形成 β-半乳糖苷酶β-半乳糖苷酶，底物 X-gal也就不会被分解。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】相同；不能；不能；DNA连接酶；AmpR基因；蓝色；白色；β-半乳糖苷酶
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/10 8:0:9组卷：6引用：1难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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