常见的探针有核酸探针和蛋白质探针。两种探针结构和功能均不相同,故而应用在不同的检测中。而两种探针的制备过程中所应用的技术也不相同。请回答下列问题。
Ⅰ、蛋白质探针的制备。
(1)蛋白质探针常用 单克隆抗体单克隆抗体技术来制备。该技术的基本流程是将 特定的抗原特定的抗原注射给实验动物,获取的脾细胞与骨髓瘤细胞融合后,用HAT培养基筛选培养对象。该筛选过程得到的杂交瘤细胞是产生 抗体抗体的杂交瘤细胞,接下来要经过 抗体抗体检测来获得产生特定蛋白的杂交瘤细胞。最终将纯化得到的特定蛋白结合上荧光或放射性标记,即为蛋白质探针。
(2)上述HAT培养基是 液体液体(填“液体”或“固体”)培养基。融合成杂交瘤细胞后再检测寻找产生特定目标蛋白的杂交瘤细胞,而不直接在脾细胞中寻找产生特定蛋白的B淋巴细胞的原因是 B淋巴细胞不能分裂,不具备克隆化的能力,培养产生的抗体浓度低,不足以检测B淋巴细胞不能分裂,不具备克隆化的能力,培养产生的抗体浓度低,不足以检测。
Ⅱ、不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA(ssDNA)的方法。该方法制备的ssDNA结合上荧光或放射性标记,即为核酸探针。

(3)不对称PCR中加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物,含量较多的被称为非限制性引物。两者的比例通常为1:100。PCR反应的最初的若干次循环中,其扩增产物主要是双链DNA(dsDNA),但当限制性引物消耗完后,就会产生大量的ssDNA。据下图可知,最后大量获得的ssDNA是图中的 甲甲(填“甲”或“乙”)链。
(4)若反应最初有a个模板DNA分子,最初的6次循环扩增产生dsDNA,后10个循环均只扩增ssDNA,则需要限制性引物 (27-2)a2(27-2)a2个。请绘制这16个循环中ssDNA的分子数量随循环次数的变化图2。(说明:纵轴的刻度请自行标注。)
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【考点】单克隆抗体及其应用;DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】单克隆抗体;特定的抗原;抗体;抗体;液体;B淋巴细胞不能分裂,不具备克隆化的能力,培养产生的抗体浓度低,不足以检测;甲;
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【解答】
【点评】
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发布:2024/9/12 1:0:10组卷:2引用:1难度:0.5
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发布:2024/12/31 1:30:1组卷:7引用:3难度:0.6 -
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发布:2024/12/31 3:30:1组卷:18引用:2难度:0.7