Cre/loxP重组酶系统是在基因或染色体水平上对生物基因进行遗传改造的一种技术，可以在DNA的特定序列进行定点切割和重新连接。请回答下列问题：
（1）图1是利用Cre/loxP酶系统敲除基因的过程。loxP序列具有方向性，由中间的间隔序列和两侧的反向重复序列组成，其中决定方向的序列是 间隔序列间隔序列。图1中一条DNA片段上待敲除基因的两端存在同向loxP序列，Cre酶能识别并结合到loxP序列的反向重复序列区，定点切断间隔序列的 磷酸二酯键磷酸二酯键，从而实现目标基因的敲除，敲除的基因片段会形成 环状环状（填“线状”或“环状”）结构。若经Cre酶作用使得2个loxP位点间的序列发生反转，其原因可能是 两个loxP序列方向相反两个loxP序列方向相反。
（2）Cre/loxP酶系统可以调控基因的表达，在目的基因 上游上游（填“上游”或“下游”）插入一个带有loxP位点的编码终止密码子的序列，在Cre酶存在的情况下，目的基因 表达表达（填“表达”或“不表达”）。
（3）图2是利用Cre/loxP酶系统构建融合基因的过程。首先分别扩增Bt基因和Bar基因，以获得所需要的DNA片段，然后用Cre/loxP酶系统处理连接后的DNA片段，获得Bt-Bar融合基因片段。PCR1过程中，所用的2种引物的结合位置分别在 启动子外侧和终止子内侧（启动子和终止子的左侧）启动子外侧和终止子内侧（启动子和终止子的左侧）；该过程中，还需添加的物质有 TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）缓冲液等TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）缓冲液等（至少写2种）等。有研究表明，大多数限制酶对裸露的位点不能识别切割，因此必须对识别序列5'末端进行修饰并加上一个至几个保护碱基，如GGG。由此推测，对Bar基因引物5′端序列的要求是 引物的5'端均要连接上loxP序列，并在末端加上保护碱基序列（GGG）引物的5'端均要连接上loxP序列，并在末端加上保护碱基序列（GGG）。
【答案】间隔序列；磷酸二酯键；环状；两个loxP序列方向相反；上游；表达；启动子外侧和终止子内侧（启动子和终止子的左侧）；TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）缓冲液等；引物的5'端均要连接上loxP序列，并在末端加上保护碱基序列（GGG）
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/11 8:0:9组卷：30引用：2难度：0.5
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