白细胞抗原基因（SLA-2基因）是重要的免疫应答基因。科研人员克隆SLA-2基因，构建该基因的表达载体，进而获得该基因优势表达的猪肾上皮细胞。该实验的主要流程如图1（已知SLA-2基因长度为1100bp,质粒B的总长度为4445bp,其限制酶切割位点后的数字表示距复制原点的距离）。其中四种限制酶识别序列和切割位点如表，回答下列问题：
| 限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ |
| 识别序列及切割位点 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
DNA（半保留）复制
DNA（半保留）复制
，为了使扩增的SLA-2基因与质粒连接，需要在引物的 5'
5'
（填3或5）端加上 NotI、XbaI
NotI、XbaI
限制酶识别序列。扩增结束后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物，检测发现扩增产物中除目的基因外，还有其他不同大小片段的非目的基因，可能的原因一般有以下哪些 ①③
①③
（填序号）。①模板受到污染
②复性温度过高
③引物太短
④延伸温度偏低
（2）过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是
扩增重组DNA分子
扩增重组DNA分子
，该过程需要用 Ca2+
Ca2+
处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将大肠杆菌涂布在含有 氨苄青霉素
氨苄青霉素
（抗生素）的培养基上培养。（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切质粒C后进行电泳，依据图2，在图2上画出可能得到的电泳条带，同时在右侧标出DNA片段长度
（4）科研中，一般利用最小致死浓度（使某种细胞全部死亡的最小浓度）的嘌呤霉素溶液处理以初步筛选转化的猪肾上皮细胞。为确定初步筛选转化猪肾上皮细胞的最小致死嘌呤霉素浓度，科研人员利用
未转化的猪肾上皮
未转化的猪肾上皮
细胞进行相关实验，结果如图3。根据实验结果应使用浓度为 80ug/mL
80ug/mL
的嘌呤霉素溶液初步筛选转化的猪肾上皮细胞，理由是 80ug/mL的嘌呤霉素溶液浓度是使未转化的猪肾上皮细胞（没有抗嘌呤霉素的细胞）全部死亡的最小浓度，能存活生长的即为已转化的猪肾上皮细胞（有抗嘌呤霉素的细胞）
80ug/mL的嘌呤霉素溶液浓度是使未转化的猪肾上皮细胞（没有抗嘌呤霉素的细胞）全部死亡的最小浓度，能存活生长的即为已转化的猪肾上皮细胞（有抗嘌呤霉素的细胞）
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA（半保留）复制；5'；NotI、XbaI；①③；扩增重组DNA分子；Ca2+；氨苄青霉素；；未转化的猪肾上皮；80ug/mL；80ug/mL的嘌呤霉素溶液浓度是使未转化的猪肾上皮细胞（没有抗嘌呤霉素的细胞）全部死亡的最小浓度，能存活生长的即为已转化的猪肾上皮细胞（有抗嘌呤霉素的细胞）
；未转化的猪肾上皮；80ug/mL；80ug/mL的嘌呤霉素溶液浓度是使未转化的猪肾上皮细胞（没有抗嘌呤霉素的细胞）全部死亡的最小浓度，能存活生长的即为已转化的猪肾上皮细胞（有抗嘌呤霉素的细胞）【解答】
【点评】
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发布：2024/7/5 8:0:9组卷：12引用：2难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
