多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，猪肉是我国最主要的肉类消费品，提高其PUFAs含量对居民健康具有重要意义。为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育转fat1基因猪，操作过程如图1。
（1）利用PCR技术扩增fat1基因时，应在两种引物的一端分别加上限制酶 EcoRⅠEcoRⅠ和 BamHⅠBamHⅠ识别与切割的序列。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体一般选用两种限制酶，选择的原则是 B、DB、D。
A.目的基因编码蛋白质的序列中有两种限制酶切割位点
B.表达载体内，每种限制酶只有一个切割位点
C.酶切后，目的基因两端的黏性末端序列相同
D.酶切后，载体形成的两个黏性末端序列不同
（2）图1中的连接产物需先导入大肠菌中的原因是 连接产物为混合物，需先导入大肠菌筛选正确的重组表达载体，再导入猪成纤维细胞，以提高转基因的成功率连接产物为混合物，需先导入大肠菌筛选正确的重组表达载体，再导入猪成纤维细胞，以提高转基因的成功率；所构建的重组基因表达载体中未标注出的必需元件还有 复制原点和标记基因复制原点和标记基因。
（3）将重组表达载体转染猪成纤维细胞，另设一组空白对照。48小时后于荧光显微镜下观察到 转染重组表达载体的猪成纤维细胞有绿色荧光，而空白对照组无绿色荧光转染重组表达载体的猪成纤维细胞有绿色荧光，而空白对照组无绿色荧光，说明转染成功。然后以转基因细胞为核供体构建克隆胚胎，最终获得转fat1基因猪。
（4）研究者提取转基因猪的基因组DNA，利用限制酶DraⅢ将其完全酶切并电泳分离。然后用探针通过 分子杂交分子杂交的方法，检测fat1基因是否成功整合在猪基因组DNA中，酶切方式及检测结果如图2。
①转基因猪1、2、3中分别被转入了 1、2、11、2、1个fat1基因。
②请解释图2检测结果中4条杂交带位置不同的原因：4个fat1基因插入在基因组中的位点不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，电泳分离后，其分布在凝胶的不同位置4个fat1基因插入在基因组中的位点不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，电泳分离后，其分布在凝胶的不同位置。
③该实验 不能不能（填“能”或“不能”）说明成功培育转基因猪，理由是 没有检测fat1基因是否成功表达；没有在个体生物学水平鉴定转基因猪的PUFAs没有检测fat1基因是否成功表达；没有在个体生物学水平鉴定转基因猪的PUFAs。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】EcoRⅠ；BamHⅠ；B、D；连接产物为混合物，需先导入大肠菌筛选正确的重组表达载体，再导入猪成纤维细胞，以提高转基因的成功率；复制原点和标记基因；转染重组表达载体的猪成纤维细胞有绿色荧光，而空白对照组无绿色荧光；分子杂交；1、2、1；4个fat1基因插入在基因组中的位点不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，电泳分离后，其分布在凝胶的不同位置；不能；没有检测fat1基因是否成功表达；没有在个体生物学水平鉴定转基因猪的PUFAs
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：36引用：2难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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