U-mir是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些RNA尾端的一段非编码序列（3'-UTR）结合，进而影响基因的表达。为探究U-mir是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将基因B中对应3'-UTR的DNA片段与荧光素酶基因（U-mir不影响荧光素酶基因的表达）重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增基因B对应3'-UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核苷酸序列合成

引物

引物

。
（2）利用

限制酶（或限制性内切核酸酶）和DNA连接酶

限制酶（或限制性内切核酸酶）和DNA连接酶

（填酶的种类）可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体（如图1）上的

2

2

位点，构建重组载体。
（3）将重组载体与U-mir共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将

荧光素酶基因表达载体

荧光素酶基因表达载体

、

重组载体

重组载体

分别导入两组家蚕胚胎细胞。
（4）科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取蛋白质，经处理检测后获得相对荧光值（在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光），其结果如图2。
依据实验结果可推断：

U-mir影响基因B的表达

U-mir影响基因B的表达

。分析可能原因：

U-mir与基因B所转录的mRNA的3'-UTR（根据碱基互补配对原则）结合，进而抑制基因B的表达（翻译过程）

U-mir与基因B所转录的mRNA的3'-UTR（根据碱基互补配对原则）结合，进而抑制基因B的表达（翻译过程）

。