生长素参与植物生长发育的调节，生长素运输蛋白（PINI）对LAA的极性运输具有重要作用。为研究35S启动子（一种来自病毒的强启动子）能否引起下游基因的过量表达，研究人员将35S启动子与PINI基因转入拟南芥，观察PINI过量表达对植物的影响。
（1）获取PINI基因的mRNA后，通过RTPCR扩增获取PINI基因（DNA）时所需要的酶是 逆转录酶、Taq酶逆转录酶、Taq酶。每次PCR循环分为3步，其中所需温度最低的一步称为 退火（或复性）退火（或复性）。
（2）PINI基因不能直接导入受体细胞，需要构建PINI表达载体。构建PINI表达载体的目的是 利于PINI基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代；利于PINI基因在受体细胞中表达和发挥作用利于PINI基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代；利于PINI基因在受体细胞中表达和发挥作用。
（3）为将PINI基因以正确方向插入质粒需要双酶切。在设计引物时，需在引物的5'端加入相应的酶切位点。已知PINI基因的1链为转录的模板链，据图分析，引物1和引物2的酶切位点分别为 PstI、EcoRIPstI、EcoRI，理由是 因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位点不能为XhoI，1链为转录的模板链，该链在启动子后的方向应为3'→5'，因此，引物2应位于PINI基因的上游，其上应构建EcoRI的酶切位点；引物应1位于PINI基因的下游，其上应构建PstI的酶切位点因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位点不能为XhoI，1链为转录的模板链，该链在启动子后的方向应为3'→5'，因此，引物2应位于PINI基因的上游，其上应构建EcoRI的酶切位点；引物应1位于PINI基因的下游，其上应构建PstI的酶切位点。
（4）提取转基因拟南芥的DNA，用相应引物扩增出35S启动子和PINI基因。为检测目的基因是否导入拟南芥，应电泳检测扩增产物中的 35S启动子35S启动子，不检测另一种的原因是 拟南芥细胞中原本存在PINI基因，检测PINI基因无法确定外源PINI基因是否导入受体细胞拟南芥细胞中原本存在PINI基因，检测PINI基因无法确定外源PINI基因是否导入受体细胞。也可在个体水平上进行检测，方法是 对转基因拟南芥喷洒适宜浓度的除草剂，观察能否存活对转基因拟南芥喷洒适宜浓度的除草剂，观察能否存活。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录酶、Taq酶；退火（或复性）；利于PINI基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代；利于PINI基因在受体细胞中表达和发挥作用；PstI、EcoRI；因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位点不能为XhoI，1链为转录的模板链，该链在启动子后的方向应为3'→5'，因此，引物2应位于PINI基因的上游，其上应构建EcoRI的酶切位点；引物应1位于PINI基因的下游，其上应构建PstI的酶切位点；35S启动子；拟南芥细胞中原本存在PINI基因，检测PINI基因无法确定外源PINI基因是否导入受体细胞；对转基因拟南芥喷洒适宜浓度的除草剂，观察能否存活
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/22 8:0:10组卷：35引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
