HSV1是单纯疱疹病毒的一种类型，HSV1病毒颗粒的组装主要由包装信号序列（a′）介导。科研人员从HSV1基因组中分离出a′，利用基因工程技术构建了质粒pHSL并进行了相关实验（如图1），从而为某些神经系统疾病的基因治疗提供依据。请回答问题：
（1）从HSV1中分离a′时，将人工合成的含特定序列的核酸探针与含有目的序列的酶解片段进行 杂交杂交，根据阳性信号逐步筛选出尽可能短的a′所在片段。
（2）构建质粒pHSL时，过程②需要用限制酶 BamHⅠ和SalⅠBamHⅠ和SalⅠ处理质粒pHSV和质粒pSK，处理后的产物经鉴定、纯化后用 DNA连接DNA连接酶连接。
（3）步骤③将质粒pHSL导入大肠杆菌是因为质粒pHSL中含有 大肠杆菌复制原点大肠杆菌复制原点，能在大肠杆菌细胞内复制而获得大量拷贝。
（4）Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。进行Vero细胞培养时，通常采用添加了 血清血清等天然成分的基本培养基提供营养。
（5）tsK株是具有感染性的HSV1温度敏感株。在tsK株的辅助下，pHSL能组装成不含完整病毒基因组的颗粒（假病毒），获得含假病毒和tsK株的混合毒株。图2是Vero细胞连续传代过程中，混合毒株的滴度变化曲线及每代中假病毒所占的比例（柱形图）。据图分析，应选用 P6P6代混合毒株用于后续神经细胞的接种实验，理由是 P6代混合病毒中tsK株滴度最低，假病毒颗粒的比例最高，尽量减少tsK株可能造成的细胞毒性P6代混合病毒中tsK株滴度最低，假病毒颗粒的比例最高，尽量减少tsK株可能造成的细胞毒性。
（6）为验证假病毒能否感染体外培养的神经细胞并表达Laz基因，科研人员将混合毒株与大鼠神经细胞按一定比例在 3737℃下混合培养48 h,用含 XgalXgal（填物质名称）的检测液原位检测β半乳糖苷酶的活性，结果发现大约20%的细胞变蓝，说明 假病毒能感染神经细胞，将外源基因Laz导入并表达假病毒能感染神经细胞，将外源基因Laz导入并表达。
【答案】杂交；BamHⅠ和SalⅠ；DNA连接；大肠杆菌复制原点；血清；P6；P6代混合病毒中tsK株滴度最低，假病毒颗粒的比例最高，尽量减少tsK株可能造成的细胞毒性；37；Xgal；假病毒能感染神经细胞，将外源基因Laz导入并表达
【解答】
【点评】
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发布：2024/5/11 8:0:9组卷：29引用：2难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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