已知组成型启动子可以高效地启动目的基因在植物各种组织中的表达，但常会阻碍植物的生长发育。诱导型启动子可在特定环境条件下诱导目的基因的表达。沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员通过构建AmDHN基因表达载体，以培育耐旱苜蓿新品种，所用载体如图1所示，请回答下列问题：
（1）用载体1构建含AmDHN目的基因的表达载体，可以成功转化苜蓿，但会出现抑制抗性芽生长和抗性植株生根的现象，推测33S启动子属于 组成型组成型启动子。
（2）图2是科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是 SacⅠ和SmaⅠSacⅠ和SmaⅠ。为了改造载体1中的启动子，需要用 BclⅠ和SacⅠBclⅠ和SacⅠ酶切割载体1、2为最佳。
（3）构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因的表达载体后，先将其导入 农杆菌农杆菌，再转化苜蓿。转化后应在培养基中添加 新霉素新霉素进行筛选。
（4）为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的表达水平，科研人员做了相关实验。下表呈现了部分操作步骤，请完成表格：
| 实验步骤的目的 | 简要操作过程 |
| ① 使幼苗适应外界的自然环境（进行炼苗） 使幼苗适应外界的自然环境（进行炼苗） |
在转基因无菌苗根系长至2-3 cm时，将培养无菌苗三角瓶的封口膜打开，培养一周，观察其生长状况 |
| 提供适宜生长条件 | 将甲组幼苗根系至于300mL水中 |
| 模拟干旱胁迫条件 | ② 将乙组幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 将乙组幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 |
| 无关变量控制 | 将甲、乙两组置于温度、光照等条件适宜且相同的环境中培养8h,之后剪取两组叶片放在液氮中储存 |
| ③ 检测PCR扩增产物量，估算目的基因的表达量 检测PCR扩增产物量，估算目的基因的表达量 |
对叶片研磨、离心后，提取总RNA，以 AmDHN和 MtActin基因两端脱氧核苷酸序列为依据设计引物，进行RT-PCR扩增，其中MtActin（一种细胞骨架蛋白）为内参。扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，EB（澳化乙锭＞染色照相如图。 |
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】组成型；SacⅠ和SmaⅠ；BclⅠ和SacⅠ；农杆菌；新霉素；使幼苗适应外界的自然环境（进行炼苗）；将乙组幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中；检测PCR扩增产物量，估算目的基因的表达量
【解答】
【点评】
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发布：2024/9/12 15:0:9组卷：6引用：1难度：0.5
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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