糖化酶是将淀粉转化为葡萄糖的酶，大部分野生酵母菌因缺乏糖化酶基因而不能直接利用淀粉。研究人员将经诱变处理后获取的黑曲霉菌高产糖化酶基因导入毕赤酵母CS115（对氨苄青霉素不敏感）中，构建能直接利用淀粉的工程菌，该过程所用质粒（仅示部分结构）如图1所示。质粒的外侧链为a链，内侧链为b链。基因Ampr转录的模板链属于b链的片段。请回答下列问题。
（1）经诱变获得高产菌株后，获取高产糖化酶基因并对其进行PCR扩增，为了方便切割且能够准确和运载体结合，需要在两种引物的 5′5′（5′或3′）端连接限制酶 BamHI和XbalBamHI和Xbal识别的序列。扩增过程中需要 耐高温DNA聚合酶/Taq酶耐高温DNA聚合酶/Taq酶催化。
（2）将高产糖化酶基因表达载体导入毕赤酵母，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程称为 转化转化。高产糖化酶基因表达时，RNA聚合RNA聚合酶识别启动子并与启动子结合开启转录，其转录时的模板链属于 aa链的片段。
（3）毕赤酵母GS115是一种组氨酸营养缺陷型微生物，自身不能合成生长必需的组氨酸，因此可利用 不含组氨酸不含组氨酸的基础培养基（不含淀粉）初步筛选导入高产糖化酶基因表达载体的毕赤酵母GS115，再将筛选出的细胞转接至含 甲醇甲醇的培养液（含淀粉）中进行发酵产酶性能测定。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】5′；BamHI和Xbal；耐高温DNA聚合酶/Taq酶；转化；RNA聚合；a；不含组氨酸；甲醇
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/9 8:0:9组卷：0引用：1难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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