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温故知新
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1931．科学家培育荧光鼠的设计思路可用下面的图解表示．
依据设计程序，回答下列问题：
（1）科学家在过程A中对天然质粒做的修饰改造是．
（2）检测荧光小鼠细胞内是否含有基因X，在分子水平上通常用作探针；判断转基因荧光鼠荧光基因的表达是否成功，在个体水平上应检测．
（3）基因工程的操作步骤中其中核心的步骤是（填字母）．
（4）质粒上的启动子和起始密码子的区别是．
（5）图中荧光水母cDNA文库属于文库，不含和非编码区，（能/不能）在不同种的生物间进行基因交流．发布：2024/12/29 8:0:2组卷：4引用：1难度：0.31932．科学家已成功将蛛丝蛋白基因导入山羊受精卵，可通过转基因山羊分泌的乳汁来生产蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于特种工业领域．培育该转基因山羊的基本过程如图，据图回答下列问题．
（1）为保证实验成功，产生蛛丝蛋白的基因需要从（填”基因组”或”cDNA”）文库中获取，并与②等调控组件重组在一起，然后与载体相连建成蛛丝蛋白基因表达载体；再通过方法，将蛛丝蛋白基因表达载体导入山羊的受精卵中，获得重组细胞．
（2）将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过处理的受体母羊子宫内．由于人们对动物细胞所需营养条件还没有完全研究清楚，所以在培养早期胚胎的培养液中，通常需要加入等天然成分．若需要一次产生两头转基因羊，可将早期胚胎进行处理．
（3）综上所述，胚胎工程是对动物的所进行的多种显微操作和处理技术．像这样利用动物乳腺生产产品的技术称为．发布：2024/12/29 8:0:2组卷：13引用：1难度：0.31933．BZR1蛋白是植物特有的蛋白，与植物的抗盐性有关。研究人员通过提收胡杨细胞中编码BZRI蛋白的基因--PeBZR1基因，利用农杆菌转化法，将其转入野生型烟草细胞内，并通过筛选获得转基因烟草植株，观察转基因烟草的抗盐能力。请回答下列问题：
（1）上述实验中，胡杨的PeBZR1基因可从cDNA文库中获取，eDNA文库中的基因（填“含有”或“不含”）启动子，（填“含有”或“不含”）内含子序列。
（2）获得PrBZAR1基内后，可利用PCR技术进行扩增，其原理是.
当温度上升到90℃以上时，两条链解旋；当温度下降到50℃左右时，DNA单链与结合；当温度升高到72℃左右时，在酶的作用下，合成互补链。
（3）将PeBZR1基因与质粒结合，构建基因表达载体；基因表达载体除具有启动子、目的基因，复制原点外，一般还包括（答出两点）。
（4）若要判断PeBZR1基因是否已经插入烟草细胞染色体DNA中，可用技术进行检测：
若要通过实验判断转基因烟草与野生型烟草的抗盐能力的差异，下列关于对照组和实验组的叙述，正确的是。
A.正常培养液处理转基因烟草作为对照组，高盐培养液处理转基因烟草作为实验组
B.正常培养液处理野生型烟草作为对照组，高盐培养液处理转基因烟草作为实验组
C.正常培养液处理转基因烟草作为对照组，高盐培养液处理野生型烟草作为实验组
D.高盐培养液处理野生型烟草作为对照组，高盐培养液处理转基因烟草作为实验组发布：2024/12/29 8:0:2组卷：21引用：2难度：0.71934．以山东农业大学李铁坚教授为首的农业专家总结养猪技术，创立了新式生态大棚养猪法，也叫懒汉养猪法．
（1）懒汉养猪法充分利用锯末、农作物秸秆粉碎物等作为发酵床垫料．由于猪有拱地的习性，锯末、农作物秸秆粉碎物等就会与猪粪便混合发酵，培养有益菌供猪采食，减少饲料、节约用水等直接饲养成本，实现粪污零排放，无臭气、无污染．同时，还能生产优质肥料，用于改良土壤、促进农作物生长，主要遵循了原理．懒汉养猪法使猪只恢复了自然习性，从发酵床中采食肉眼可见的大型白色菌丝．乳酸菌与该菌丝细胞相比，最主要的区别是．料床中的各种有益菌之间的关系为．在寒冷的冬季，发酵床表层的温度仍可维持25℃-30℃的水平，主要原因是．
（2）现有发酵床混合菌种采自自然界，发酵效率较低．从瑞氏木霉cDNA文库中可获得高效的纤维素酶基因，有人将瑞氏木霉纤维素酶基因转入混合菌中，经筛选得到了可高效利用纤维素的工程混合菌菌种（过程如图甲所示）．
（1）图甲中，为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以作为唯一碳源．①、②过程需要重复几次，目的是．
（2）某同学尝试过程②的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的接种方法是；推测该同学接种时可能的操作失误是．发布：2024/12/29 8:0:2组卷：4引用：1难度：0.31935．请回答下列有关生物工程的问题：
（1）对于基因工程来说，其核心步骤是，若要培育能从乳汁中分泌人的干扰素的转基因牛，需要选择的受体细胞是（受精卵、乳腺细胞），为了让转入的干扰素基因高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的和之间．
（2）植物体细胞杂交过程中，在把植物细胞杂交之前，必须用纤维素酶果胶酶去除细胞壁，杂交过程的另一个环节是；培育出诸如“番茄-马铃薯”这样的杂种植株利用了植物细胞全能性的原理．胚胎干细胞也有类似的特性，并且胚胎干细胞在体外培养的条件下，可以增殖而不发生．
（3）在进行单克隆抗体的生产过程中，要把两种细胞进行融合，这两种细胞一种是在体外能够大量增殖的骨髓瘤细胞，另外一种是的B细胞；体外培养的过程中，贴壁生长的细胞会出现现象．
（4）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其，另外，培养的卵母细胞需要发育至期．发布：2024/12/29 8:0:2组卷：4引用：1难度：0.51936．目前全球肆虐的病毒是一种以前尚未在人类中发现的新型冠状病毒，命名为2019-nCoV（以下简称nCoV）。它具有已知RNA病毒中最大的基因组，单链RNA大小为3万个碱基左右。结构如图。
疫苗预防
针对该病毒现在还没有具有针对性的特效药，因此各国都寄希望于研制出针对该病毒的疫苗。疫苗分为以下5种：灭活疫苗，减毒活疫苗，重组蛋白疫苗，核酸疫苗，重组病毒载体疫苗。
（1）重组蛋白疫苗：中科院微生物所动物试验阶段
可以让大肠杆菌表达出nCoV的S蛋白，打进人体，让免疫系统针对该蛋白产生抗体。该过程需要将S蛋白基因转入大肠杆菌体内，你认为对该过程描述合理的是（多选）
A．用PCR可以短时间获得大量的S蛋白基因，根据需要在基因两端加上的限制性酶切位点可以不同
B．该过程的表达载体上要具有复制原点、起始密码子、终止密码子、抗生素抗性基因和S蛋白基因
C．通过Ca2+处理大肠杆菌以获得感受态细胞，该状态的细胞能够提高表达载体整合到拟核上的效率
D．能够利用大肠杆菌DNA扩增出目的基因，说明成功导入了S蛋白基因，是否表达S蛋白还需要抗体检测
（2）获得的工程菌需要筛选才能投入疫苗的生产，下列于此过程有关表述正确的是（多选）
A．筛选和鉴定菌种要在培养基中加入琼脂，大肠杆菌在伊红美蓝培养基上会出现黑色菌落
B．培养基配制过程要称量、溶化、灭菌，倒平板之前调节pH值到适宜范围以利于细菌繁殖
C．如果需要计数，则用稀释涂布平板法涂布平板之后对菌落计数，显微镜直接观察值可能偏小
D．将高产S蛋白的菌种保存起来可以用4℃临时保藏和-20℃甘油管藏等方法，后者保存时间长
（3）工程菌操作整个过程需要严格的无菌操作，下列无菌操作方式合理的有（多选）
A．每次使用接种环前后都要进行灼烧灭菌，但是灼烧之后要置于菌液冷却才能使用
B．液体培养基用高压蒸汽灭菌，加了琼脂的固体培养基可以用干热灭菌箱灭菌
C．操作者双手应该用酒精擦拭消毒，但是该过程不能完全杀死微生物的芽孢和孢子
D．倒平板凝固后要将培养皿倒置，目的是防止水分过快蒸发以及冷凝水回滴造成污染
（4）核酸疫苗：美国人体试验阶段（未做动物试验）
将S蛋白对应的mRNA用脂膜包裹打进人体，让它在细胞里表达病毒的S蛋白。以下对该方法的误解是（多选）
A．核酸注入人体细胞只会造成体细胞的遗传物质发生变化，并不影响生殖细胞
B．该过程流程大大简化，节省了重组蛋白疫苗的生产S蛋白的时间
C．mRNA如果成功进入细胞，翻译产生的S蛋白就可以在细胞内对抗病毒
D．核酸外脂膜与细胞膜融合，帮助核酸进入细胞指导S蛋白的翻译
（5）重组病毒载体疫苗：军事科学院临床Ⅱ期阶段（动物试验和临床Ⅰ期完成）
是把nCoV的部分基因植入到不致病但侵染能力很强的腺病毒载体里，重组成新病毒。任何疫苗在大规模使用前，最好通过动物试验再进行临床试验。大规模试验用哺乳动物一般用小鼠，但是小鼠没有人类ACE2蛋白，因此获得大量人源ACE2转基因小鼠成为动物疫苗试验的重要步骤。在此过程中下 列表述合理的是（多选）
A．鉴于人类基因组测序已经完成，既可以从人类基因组文库中获取目的基因，又可以从cDNA文库中获取
B．鉴于小鼠也是真核生物，既可以将人类ACE2完整的基因导入小鼠体内，又可以导入无内含子的目 的基因
C．鉴于受体细胞是小鼠的受精卵细胞，重组DNA分子导入最好用显微注射的方法，该方法不适合原核生物细胞
D．如果有转人源ACE2基因小鼠若干，要在短时间获得大量实验小鼠，可用核移植的方法克隆很多小鼠发布：2024/12/29 8:0:2组卷：14引用：1难度：0.61937．如图为cDNA文库构建的部分示意图，请据图回答：
（1）①表示过程，需要添加的原料是。
（2）①过程所用的酶与所有的DNA聚合酶相似，不能，需要添加引物。由于大多数真核生物的mRNA3′端为多聚腺苷酸，因此，可以设计以为引物。
（3）②、③过程表示用大肠杆菌 RNase把DNA-RNA杂交分子中的RNA链降解成许多片段，以残余的RNA为引物合成互补链，并经过一系列过程去除中间的引物，由此形成的互补链处于间断状态，所以④过程须添加酶，形成端带有小段RNA的双链cDNA。
（4）cDNA可以用PCR技术扩增，一般设计长度在15-30个碱基之间的种引物，引物过长，会导致与模板DNA的杂交效率下降，使PCR的反应效率。PCR时，预变性设置的时间明显长于变性时间，目的是。发布：2024/12/29 8:0:2组卷：3引用：1难度：0.71938．绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV 蛋白，叶片对TMV 具有抗感染性．烟草是具有重要经济价值的双子叶植物，由于TMV 的感染会导致大幅度减产．研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV 的烟草，主要流程如图所示．
（1）理论上，基因组文库含有生物的基因；而cDNA 文库中含有生物的基因．
（2）科学家从绞股蓝细胞中提取抗TMV 基因转录的RNA，然后合成目的基因．图中①过程表示．
（3）④过程将重组Ti 质粒导入烟草体细胞的常用方法是．
（4）由图分析，在过程③构建的重组Ti 质粒上应该含有的标记基因是基因，它的作用是．
（5）过程⑥可采取的方法，检测植株是否合成了抗TMV 蛋白．在个体水平的鉴定过程中，可通过的方法来确定植株是否具有抗性．发布：2024/12/29 8:0:2组卷：9引用：1难度：0.31939．除草剂的有效成分草甘膦能够专一性地抑制EPSP合酶的活性，从而使植物体内多种代谢途径受到影响而导致植物死亡。草甘膦没有选择性，它在除掉杂草的同时也会使作物受损。解决这个问题的方法之一就是培育抗草甘膦的作物，下列关于转入外源EPSP合酶基因使矮牵牛抗草甘膦流程的叙述错误的是（ ）
发布：2024/12/29 8:0:2组卷：13引用：2难度：0.71940．玉米作为一种重要的经济作物，被广泛用于食品、饲料、工业和新能源产业。科技工作者采用基因工程技术，成功将抗虫基因导入玉米，培育出具有抗虫性状的优良品种。请回答下列问题：
（1）已知抗虫基因来自于cDNA 文库，在构建基因表达载体时（填“需要”或“不需要”）在目的基因的首端添加启动子，原因是。请写出启动子的作用：。
（2）将切伤后的玉米胚芽尖端浸泡在含有抗虫基因的农杆菌菌液中10分钟，插入玉米萌发培养基，在黑暗条件下培养3 天即可获得幼苗。对芽尖进行切伤处理的目的是。由玉米胚芽尖端组织能够培育出幼苗，体现了植物细胞具有。
（3）抗虫基因导入玉米后，能否赋予其抗虫特性，最终需要进行水平的抗虫接种实验。在确认玉米已经获得抗虫性状后，可通过方法获得稳定遗传的品种。发布：2024/12/29 8:0:2组卷：12引用：1难度：0.7
